本文關(guān)鍵詞：K652重組表達(dá)IL-6基因?qū)K細(xì)胞表型和功能的影響

  更多相關(guān)文章： 重組K IL- 自然殺傷細(xì)胞 擴(kuò)增 Cr釋放實(shí)驗(yàn)

【摘要】：目的:為了研究表達(dá)IL-6的重組K562細(xì)胞對(duì)自然殺傷細(xì)胞(NK)細(xì)胞的擴(kuò)增數(shù)量、表型和功能的影響。方法:根據(jù)人類IL-6 c DNA的5'端序列,設(shè)計(jì)PCR引物以K562細(xì)胞c DNA文庫(kù)的DNA為模板進(jìn)行擴(kuò)增,表達(dá),轉(zhuǎn)染,在K562細(xì)胞上表達(dá)IL-6基因,構(gòu)建重組的K562工程細(xì)胞作為刺激細(xì)胞,以人外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)為擴(kuò)增培養(yǎng)對(duì)象,使NK細(xì)胞在體外培養(yǎng)條件下得到大量的擴(kuò)增。流式細(xì)胞儀分析NK細(xì)胞表型。將NK細(xì)胞作用到K562細(xì)胞,對(duì)其殺傷性進(jìn)行功能分析,51Cr釋放實(shí)驗(yàn)檢測(cè)NK細(xì)胞對(duì)K562細(xì)胞殺傷水平的影響。結(jié)果:成功構(gòu)建了表達(dá)IL-6的重組K562細(xì)胞,和PBMC共同孵育后,培養(yǎng)體系經(jīng)過(guò)21 d的刺激后,IL-6重組K562細(xì)胞誘導(dǎo)PBMC擴(kuò)增,CD56+CD16+CD3-細(xì)胞數(shù)量比誘導(dǎo)前擴(kuò)增了(760±18)倍,CD56+CD16+CD3-細(xì)胞的純度從培養(yǎng)前占PBMC的6%±0.4%,擴(kuò)增后第3組結(jié)果比未擴(kuò)增的多了91%±2%。細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)表明,在NK效應(yīng)細(xì)胞∶K562靶細(xì)胞為5∶1時(shí),擴(kuò)增的NK細(xì)胞的殺傷率達(dá)到了92%±2%。結(jié)論:本方法以重組K562為刺激細(xì)胞,能夠?qū)崿F(xiàn)NK細(xì)胞體外的大規(guī)模制備,建立了優(yōu)化的NK細(xì)胞體外擴(kuò)增方法,且擴(kuò)增的細(xì)胞殺傷K562細(xì)胞的活性較好。對(duì)于NK的大量擴(kuò)增和應(yīng)用于臨床具有重要的指導(dǎo)意義。
【作者單位】： 河北省胸科醫(yī)院 河北省肺癌防治中心;河北師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 重組K IL- 自然殺傷細(xì)胞 擴(kuò)增 Cr釋放實(shí)驗(yàn)
【基金】：2013年河北省省級(jí)重大醫(yī)學(xué)研究課題(No.ZD2013063) 國(guó)家自然科學(xué)基金(No.31101638)
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 現(xiàn)在腫瘤對(duì)人類生存健康的威脅越來(lái)越嚴(yán)重,對(duì)腫瘤的治療方法也發(fā)生著越來(lái)越多的變化,各種各樣的腫瘤治療已經(jīng)顯現(xiàn)出來(lái),成為治療腫瘤的重要發(fā)展方向。繼腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞(TIL)、淋巴因子激活殺傷細(xì)胞(LAK)及CD3單抗激活的殺傷細(xì)胞(CD3AK)后,自然殺傷細(xì)胞(Nature killer,NK)的殺，

本文編號(hào)：993838