目的:探討IL-4和TGF-β對(duì)Mφ溶酶體功能和定位的影響及可能機(jī)制。方法:骨髓細(xì)胞經(jīng)M-CSF刺激培養(yǎng)成骨髓來(lái)源巨噬細(xì)胞（Bone marrow-derived macrophages, BMDMs）。分別使用PBS、IL-4、TGF-β或TGF-β+IL-4刺激BMDMs,流式細(xì)胞儀檢測(cè)BMDMs溶酶體降解DQ-OVA的功能;激光共聚焦檢測(cè)溶酶體胞內(nèi)分布;免疫印跡和免疫熒光檢測(cè)溶酶體關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子TFEB的表達(dá)和活化;慶大霉素保護(hù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)BMDMs殺傷細(xì)菌的功能。結(jié)果:與對(duì)照組比較,IL-4增強(qiáng)溶酶體降解DQ-OVA的功能;促進(jìn)溶酶體向核周分布;上調(diào)TFEB的表達(dá)和活化;并且增強(qiáng)巨噬細(xì)胞殺菌功能。而與對(duì)照組比較,TGF-β抑制溶酶體降解DQ-OVA的功能;阻止其核周分布;下調(diào)TFEB表達(dá)和活化;并且抑制其殺菌功能。結(jié)論:IL-4和TGF-β通過(guò)調(diào)控TFEB表達(dá)和溶酶體定位調(diào)節(jié)Mφ殺菌功能。 

【文章來(lái)源】：湖北醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報(bào). 2019年04期 第305-308+334+300頁(yè)

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【部分圖文】：

不同細(xì)胞因子對(duì)溶酶體降解DQ－OVA功能的影響

?糜?飪固澹?檢測(cè)TFEB胞內(nèi)定位，也檢測(cè)到相同的結(jié)果，IL－4促進(jìn)TFEB向核內(nèi)轉(zhuǎn)移，而TGF－β抑制TFEB向核內(nèi)轉(zhuǎn)移，結(jié)果如圖3D。該結(jié)果說(shuō)明IL－4和TGF－β逆向調(diào)控TFEB表達(dá)與活性。2．4IL－4和TGF－β反向調(diào)節(jié)Mφ殺菌功能與對(duì)照組比較，IL－4增強(qiáng)溶酶體殺菌功能，細(xì)胞裂解液中存活細(xì)菌克隆明顯減少;而TGF－β作用時(shí)，細(xì)胞內(nèi)存活細(xì)菌克隆數(shù)明顯增多，并且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果如圖4。由此說(shuō)明IL－4增強(qiáng)Mφ殺菌功能，而TGF－β抑制Mφ殺菌功能。圖4不同細(xì)胞因子對(duì)BMDMs殺菌功能的影響注:與對(duì)照組比較，IL－4組*P＜0．05，TGF－β刺激組#P＜0．053討論IL－4和TGF－β都是多功能的細(xì)胞因子，在免疫反應(yīng)中發(fā)揮關(guān)鍵調(diào)節(jié)作用。IL－4激活JAK/STAT6、PI3K/AKT、p44/42/MAPK和NF－κB等信號(hào)通路，啟動(dòng)多種基因的表達(dá)，介導(dǎo)細(xì)胞生長(zhǎng)、分化，抑制細(xì)胞凋亡［10］。IL－4對(duì)Mφ具有多向作用，一方面IL－4直接上調(diào)吞噬體半胱氨酸蛋白酶表達(dá)，還可以抑制NOX2活性間接增強(qiáng)水解酶活性提升Mφ殺菌能力［11］;另一方面促進(jìn)Mφ向M2分化，抑制其對(duì)病原體的吞噬作用，但增強(qiáng)微生物誘導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)和細(xì)胞因子分泌［12］。IL－4對(duì)Mφ殺菌功能的差異，與吞噬的細(xì)菌不同、微環(huán)境中細(xì)胞因子譜系不同等有關(guān)。TGF－β是重要的抑炎細(xì)胞因子，通過(guò)調(diào)節(jié)NF－κB、C/EBP、mTOＲC1和MAPK等信號(hào)通路，抑制Mφ活化并調(diào)節(jié)其分化［13］。TGF－β還可刺激Mφ表達(dá)IL－10等抑炎性因子，抑制TNF－α、IL－12和CD80等分子的表達(dá)，向M2分化，發(fā)揮抑制炎癥的作用。但它


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