本文關(guān)鍵詞：麥胚抗氧化肽RVF對SH-SY5Y細(xì)胞氧化應(yīng)激的調(diào)控及其機(jī)理研究

  更多相關(guān)文章： 麥胚抗氧化肽 人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株SH-SY5Y 氧化應(yīng)激 凋亡

【摘要】：氧化應(yīng)激是引起許多慢性疾病的主因之一。神經(jīng)細(xì)胞承擔(dān)著人類思考和活動的責(zé)任,新陳代謝較快,而其細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶的表達(dá)相對較低,所以易受氧自由基攻擊。雖然目前已有一些報道證實麥胚活性多肽在體內(nèi)外具有一定的抗氧化能力,但大部分研究還局限于體外自由基清除效果的檢測或傳統(tǒng)的動物實驗方面,缺乏抗氧化肽在細(xì)胞、分子水平機(jī)制的研究。因此,本論文將采用H202作為氧化應(yīng)激的誘導(dǎo)劑,以人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株SH-SY5Y作為研究載體,較深入地探討麥胚抗氧化肽RVF (Arg-Val-Phe)的抗氧化機(jī)制,可為其在緩解氧化應(yīng)激、預(yù)防神經(jīng)退行性疾病等領(lǐng)域的應(yīng)用提供重要的理論依據(jù),也可為麥胚資源的綜合利用提供新的途徑。論文選擇分離純化獲得再固相合成的麥胚抗氧化肽作為研究對象,通過H202誘導(dǎo)建立了SH-SY5Y細(xì)胞氧化損傷模型,從細(xì)胞成活率、細(xì)胞形態(tài)觀察了RVF對H202誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用,結(jié)果表明200 μmol/L RVF預(yù)孵育12h后可將細(xì)胞成活率提高21.97%,細(xì)胞由皺縮狀恢復(fù)為細(xì)長的梭狀,形態(tài)上得到顯著改善。通過流式細(xì)胞術(shù)考察了細(xì)胞內(nèi)活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平,采用比色法測定了細(xì)胞內(nèi)丙二醛(Malondialdehyde, MDA)含量,結(jié)果表明RVF預(yù)處理后能有效抑制細(xì)胞內(nèi)ROS水平的上升,100、150、200 μmol/L的RVF可將細(xì)胞內(nèi)ROS水平從9.97±12.13%(p0.01)降至5.72±17.83%(p0.01)、4.21±18.29%(p0.01)、2.54±37.00%(p0.01)；并顯著地降低細(xì)胞內(nèi)的MDA含量,200 μmol/L RVF可將H202作用組MDA的含量從2.74±8.63%(p0.01)下降至1.35±16.60%(p0.01)。采用Annexin V/PI雙染法檢測了細(xì)胞凋亡率,研究表明RVF干預(yù)組SH-SY5Y細(xì)胞凋亡率顯著降低,100、200、250μmol/L RVF干預(yù)組對應(yīng)的細(xì)胞凋亡率分別為39.44%±8.75%(p0.05)、16.34%±4.16%(p0.01)、10.47%±5.06%(p0.01)。采用蛋白免疫印跡(Western blot)考察了有絲分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases, MAPK)信號通路蛋白磷酸化激活,研究表明RVF可以抑制H202誘導(dǎo)MAPK的磷酸化激活,緩解細(xì)胞氧化應(yīng)激帶來的凋亡。通過流式細(xì)胞術(shù)檢測了線粒體膜電位,結(jié)果表明RVF可恢復(fù)線粒體跨膜電位,在100、150、200μmol/L濃度下可將線粒體陰性細(xì)胞比例從92.58%±9.4%(p0.01)分別降至85.98%±8.6%(p0.01)、67.13%±7.4%(p0.01)、44.58%±5.32%(p0.01)；采用蛋白免疫印跡考察了SH-SY5Y細(xì)胞內(nèi)線粒體凋亡通路蛋白Bax/Bcl-XL的含量變化、Cytochrome C(Cyt C)的釋放及caspase 3% poly ADP-ribose poly-merase (PARP)的剪切情況,研究發(fā)現(xiàn)H202可以促進(jìn)線粒體膜上Bcl-XL的降解以及Bax的聚集,且在12h時可使Cyt C的釋放達(dá)到飽和；而經(jīng)RVF預(yù)孵育后能夠顯著增強(qiáng)Bcl-XL在線粒體上的穩(wěn)定性、抑制Bax在線粒體上的聚集,同時減弱了Cyt C的釋放；RVF還進(jìn)一步抑制了caspase-3的激活及其對底物PARP的切割。研究結(jié)果表明麥胚抗氧化肽RVF可通過抑制H202誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞的凋亡來發(fā)揮對氧化應(yīng)激的保護(hù)作用,其保護(hù)機(jī)制可能涉及維持線粒體跨膜電位、增加抗凋亡蛋白的表達(dá)及阻止線粒體通路的激活等。
【關(guān)鍵詞】：麥胚抗氧化肽 人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株SH-SY5Y 氧化應(yīng)激 凋亡
【學(xué)位授予單位】：長沙理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R363
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-11
• 第一章 緒論11-20
• 1.1 氧自由基與氧化應(yīng)激11-14
• 1.1.1 體內(nèi)氧自由基的產(chǎn)生11-12
• 1.1.2 氧自由基對人體的危害12-13
• 1.1.3 氧化應(yīng)激與神經(jīng)退行性疾病13-14
• 1.1.4 氧自由基的清除14
• 1.2 麥胚蛋白和抗氧化肽的研究現(xiàn)狀14-16
• 1.2.1 麥胚與麥胚蛋白14-16
• 1.2.2 麥胚生物活性肽研究進(jìn)展16
• 1.3 課題立項依據(jù)和研究內(nèi)容16-20
• 1.3.1 立項背景及意義16-17
• 1.3.2 課題主要研究內(nèi)容17-20
• 第二章 RVF對H_2O_2誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞氧化應(yīng)激的保護(hù)作用20-32
• 2.1 材料與儀器20-21
• 2.1.1 材料與試劑20-21
• 2.1.2 主要儀器與設(shè)備21
• 2.2 實驗方法21-24
• 2.2.1 麥胚抗氧化肽的合成21-22
• 2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)試劑的配制22
• 2.2.3 細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)與傳代、凍存22-23
• 2.2.4 H_2O_2誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞氧化損傷模型的建立23
• 2.2.5 RVF對H_2O_2誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用23-24
• 2.2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析24
• 2.3 結(jié)果與討論24-31
• 2.3.1 H_2O_2誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞氧化損傷模型的建立24-25
• 2.3.2 RVF對SH-SY5Y細(xì)胞成活率的影響25-26
• 2.3.3 RVF對H_2O_2誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用26-31
• 2.4 本章小結(jié)31-32
• 第三章 RVF對H_2O_2誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞線粒體凋亡通路的影響32-52
• 3.1 材料與儀器32-33
• 3.1.1 材料與試劑32-33
• 3.1.2 主要儀器與設(shè)備33
• 3.2 實驗方法33-35
• 3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)與分組33
• 3.2.2 Annexin V/PI雙染對SH-SY5Y細(xì)胞凋亡率的檢測33
• 3.2.3 細(xì)胞膜電位的測定33-34
• 3.2.4 Western blot對細(xì)胞MAPK通路激活的考察34
• 3.2.5 Western blot對細(xì)胞線粒體凋亡通路的考察34
• 3.2.6 蛋白濃度的測定34
• 3.2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析34-35
• 3.3 結(jié)果與討論35-50
• 3.3.1 RVF對H_2O_2誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞凋亡率的影響35-36
• 3.3.2 RVF對H_2O_2誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞MAPK通路的影響36-39
• 3.3.3 RVF對H_2O_2誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞線粒體凋亡通路的影響39-50
• 3.4 本章小結(jié)50-52
• 第四章 結(jié)論與展望52-55
• 4.1 主要結(jié)論52-53
• 4.2 創(chuàng)新點(diǎn)53
• 4.3 展望53-55
• 參考文獻(xiàn)55-66
• 致謝66-67
• 附錄A67

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 鄭天勝;李翔;;線粒體凋亡通路的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2013年18期

2 譚紀(jì)萍;劉瑛;王鑫;王魯寧;;中國人口老齡化發(fā)展趨勢與老年健康研究現(xiàn)狀[J];中國老年學(xué)雜志;2012年19期

3 馮陽;劉建軍;黃鋼;;線粒體膜通透性轉(zhuǎn)換孔結(jié)構(gòu)與功能研究進(jìn)展[J];上海交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2012年03期

4 施傳信;宋e，

本文編號：993665