β-內(nèi)酰胺抗生素的生產(chǎn)正經(jīng)歷一場(chǎng)從化學(xué)法制備向酶法制備轉(zhuǎn)變的技術(shù)變革。青霉素G�；福≒enicillin G acylase, PGA）在酶法制備技術(shù)中處于核心地位。提高PGA的合成活力將推進(jìn)β-內(nèi)酰胺抗生素的酶法合成。目前基因序列已知的PGA分別來(lái)源于革蘭氏陰性菌 （Alcaligenes faecalis （Af）, Escherichia coli （Ec）, Kluyvera citrophila （Kc）, Providencia rettgeri （Pr））以及革蘭氏陽(yáng)性菌（Bacillus megaterium （Bm） , Arthrobacter viscosus）。同屬革蘭氏陰性菌或者革蘭氏陽(yáng)性菌的PGA同源性較高，酶學(xué)性質(zhì)接近。利用定向進(jìn)化技術(shù)對(duì)pga基因進(jìn)行隨機(jī)突變和同源重組，有望獲得具有更高合成活力和更高穩(wěn)定性的新突變酶。論文第一章構(gòu)建了PGA的枯草芽孢桿菌分泌表達(dá)系統(tǒng)�？寺×藖�(lái)源于Alcaligenes faecalis （CICC AS1.767）的pga基因（Genbank 登錄號(hào)AF455356），該基因在枯草芽孢桿菌中實(shí)現(xiàn)了分泌表達(dá)。表達(dá)量較野生型... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)科學(xué)院大學(xué)(中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院)上海市

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
引言
參考文獻(xiàn)
第一章 Alcaligenesfaecalis青霉素G�；富蛟诳莶菅挎邨U菌中的分泌表達(dá)、純化和性質(zhì)研究
    1 材料和方法
    2 結(jié)果
    3 討論
第二章 不同表達(dá)元件對(duì)枯草芽孢桿菌分泌表達(dá)青霉素G�；傅挠绊�
    1 材料和方法
    2 結(jié)果
    3 討論
第三章 突變Providenciarettgeri青霉素G酰化酶基因的克隆及其在大腸桿菌中的表達(dá)
    1 材料和方法
    2 結(jié)果
    3 討論
第四章 青霉素G�；傅氖删w展示
    1 材料和方法
    2 結(jié)果
    3 討論
第五章 DNA重排技術(shù)提高青霉素G�；傅暮铣苫盍�
    1 材料和方法
    2 結(jié)果
    3 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄在學(xué)期間發(fā)表的論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]雷氏普羅威登斯菌青霉素G�；富蛟诖竽c桿菌中的克隆與表達(dá)[J]. 周政,張愛暉,周麗萍,楊晟,姜涌明,袁中一.  工業(yè)微生物. 2002(03)
[2]青霉素酰化酶活性中心的定點(diǎn)突變[J]. 戴明華,王恩多,謝雍,姜衛(wèi)紅,趙國(guó)屏.  生物化學(xué)與生物物理學(xué)報(bào). 1999(05)
[3]巨大芽孢桿菌青霉素�；冈诳莶輻U菌中的表達(dá)及其分離純化[J]. 黃艷紅,袁中一,王應(yīng)睞.  中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào). 1999(01)



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