本文關(guān)鍵詞：人胚胎干細(xì)胞傳代培養(yǎng)方法與其遺傳穩(wěn)定性的相關(guān)研究

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【摘要】：人胚胎干細(xì)胞（Human Embryonic Stem Cells，hESCs）來源于胚胎發(fā)育過程中囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)（Inner Cell Mass，ICM)。hESCs傳代過程中具有自身的特性，，即，保持自我更新、增殖、自主分化以及多能性的特性。近些年，對于人胚胎干細(xì)胞的研究越來越受到科研學(xué)者的關(guān)注。 人胚胎干細(xì)胞研究的最終目的是應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)治療，但其安全性需要提前明確。探索hESCs的遺傳穩(wěn)定性對其安全性研究至關(guān)重要。胚胎干細(xì)胞的遺傳穩(wěn)定性受到很多因素影響，例如，傳代方法，傳代時間等。隨著hESCs長期傳代培養(yǎng)，hESCs的遺傳穩(wěn)定性會出現(xiàn)發(fā)生改變。不同的傳代方法，包括機(jī)械法以及酶法傳代也會使其改變。傳統(tǒng)的G顯帶鑒定法最早應(yīng)用于檢測hESCs的遺傳改變，近來，單核苷酸多態(tài)性（SNP，Single nucleotide polymorphism）芯片由于其更加精準(zhǔn)的檢測被逐漸應(yīng)用于hESCs。中華8芯片特別覆蓋中國人特有的常見和稀有變異，能夠精確地反應(yīng)中國人的遺傳變異特點(diǎn)。應(yīng)用該芯片技術(shù)于中國人胚胎建立而成的干細(xì)胞系，可更有利于鑒定中國人干細(xì)胞的遺傳穩(wěn)定性變異。 本研究旨在探索適應(yīng)于我中心hESCs的不同傳代方法，并且應(yīng)用SNP芯片分析hESCs長期培養(yǎng)過程中基因遺傳的變化，最終為確認(rèn)hESCs傳代過程的遺傳安全性提供理論依據(jù)及實(shí)踐基礎(chǔ)。本研究的主要創(chuàng)新點(diǎn)：.應(yīng)用適合中國人遺傳變異的Omni中華8芯片，檢測利用中國人胚胎建立的人胚胎干細(xì)胞系的遺傳學(xué)變異。 目的 探索適應(yīng)于我中心人胚胎干細(xì)胞類型的不同傳代方法，以及長期傳代培養(yǎng)對其遺傳穩(wěn)定性的影響。 方法 1.利用鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心來源新鮮廢棄胚胎所建立的hESC系，均已經(jīng)過全能性鑒定。采用傳統(tǒng)的機(jī)械傳代法，以及利用胰酶、Ⅳ型膠原酶法進(jìn)行hESCs傳代培養(yǎng)，傳代后的hESCs種植于小鼠胚胎成纖維細(xì)胞和人包皮成纖維細(xì)胞按1：1混合的飼養(yǎng)層上。 2.分別提取Zh2系P35/P60代的基因組DNA，應(yīng)用高分辨率Omni中華8芯片檢測人胚胎干細(xì)胞基因組DNA，分析其分子遺傳學(xué)變異。結(jié)果 1. Ⅳ型膠原酶傳代法耗費(fèi)時間較長，不宜掌控消化時間和接種密度；0.25％EDTA-胰蛋白酶消化hESCs成單細(xì)胞狀態(tài)，接種于飼養(yǎng)層后不利于繼續(xù)生長；機(jī)械法傳代可以根據(jù)需要切割成大小不同的團(tuán)塊，并可以切除分化的或者狀態(tài)偏差的細(xì)胞，更加適合hESCs傳代。 2.利用中華8芯片對比我中心hESCs的Zh2 P35和Zh2 P60，可檢測出1130個基因位點(diǎn)差異，930個差異基因的存在。其中19號染色體的變異最大，并且涉及多條通路，與細(xì)胞的代謝、分化、凋亡，神經(jīng)、眼、腎臟、生殖等器官的發(fā)育，以及ECG、Ca等分子途徑等相關(guān)。 結(jié)論 1.機(jī)械法傳代相較于酶法傳代更適應(yīng)于我中心的人胚胎干細(xì)胞。 2.長期傳代培養(yǎng)后人胚胎干細(xì)胞不能保持遺傳穩(wěn)定性，且存在基因遺傳的變異。變異的基因涉及多條通路，通過分析可探知變異基因的生物學(xué)功能。
【關(guān)鍵詞】：胚胎干細(xì)胞 傳代 單核苷酸多態(tài)性(Single Nucleotide Polymorphism)遺傳穩(wěn)定性
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R329
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文縮略詞10-11
• 前言11-13
• 材料與方法13-22
• 1.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器、試劑和耗材13-14
• 1.2 主要試劑配制14-16
• 1.3 主要試驗(yàn)方法16-22
• 結(jié)果22-26
• 1.hESCs 傳代過程中不同傳代方式的比較22-23
• 2.傳代過程 hESCs 的遺傳變異23-26
• 討論26-32
• 1.不同傳代方法的探索26-27
• 2.hESCs 傳代對于遺傳穩(wěn)定性改變的影響27-28
• 3.基因芯片用于 hESCs 傳代檢測的意義28-32
• 結(jié)論32-33
• 參考文獻(xiàn)33-36
• 綜述 人胚胎干細(xì)胞傳代及其遺傳穩(wěn)定性的研究進(jìn)展36-46
• 參考文獻(xiàn)42-46
• 個人簡歷46
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的文章46-47
• 致謝47

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 杜娟,林戈,盧光t;人胚胎干細(xì)胞和分化細(xì)胞差別基因的篩選[J];遺傳學(xué)報(bào);2004年09期

2 王寧;王雅杰;;BRCA1基因相關(guān)的DNA修復(fù)通路異常與三陰乳腺癌化療藥物選擇的關(guān)系[J];中國癌癥雜志;2009年07期

本文編號：893453