本文關(guān)鍵詞：DNA四面體-CpG復(fù)合結(jié)構(gòu)激活細(xì)胞免疫

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【摘要】：CpG是由非甲基化的胞嘧啶和鳥嘌呤脫氧核苷酸組成的而核苷酸基序,廣泛存在于細(xì)菌的基因組中,具有免疫刺激作用。人工合成的含有CpG的寡聚脫氧核糖核苷酸(CpG ODN)可以模擬細(xì)菌肉CpG序列的免疫刺激活性,可以被被哺乳動物的免疫系統(tǒng)視為“外源威脅”,從而誘發(fā)機(jī)體的免疫應(yīng)答。所以,CpG ODN具有成為治療性DNA或免疫佐劑的潛在能力,在治療普通疾病甚至癌癥的過程中發(fā)揮輔助治療的作用。但是,未甲基化的CpG ODN易降解,且不易被細(xì)胞攝取,需要反復(fù)給藥并且提高給藥劑量,這是嚴(yán)重限制CpG應(yīng)用的一大缺陷。隨著納米技術(shù)的發(fā)展,為藥用CpG的體內(nèi)遞送提供了新的方法�，F(xiàn)有的大量研究報道證明,由納米材料載帶的CpG表現(xiàn)出了活性高、細(xì)胞毒性低、生物相容性好等新特點,有成為某些疾病治療和預(yù)防的新型免疫制劑的潛能。我們將不同數(shù)目的CpG序列與DNA四面體結(jié)合,得到不同價態(tài)的CpG-四面體復(fù)合結(jié)構(gòu),研究了該復(fù)合結(jié)構(gòu)的細(xì)胞毒性和攝取率以及進(jìn)入細(xì)胞后結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性,并評估了它們的免疫刺激效果：我們發(fā)現(xiàn)DNA四面體-CpG結(jié)構(gòu)在沒有轉(zhuǎn)染試劑輔助的情況下DNA四面體可以有效地攜帶CpG基序進(jìn)入小鼠巨噬樣細(xì)胞Raw264.7,不會產(chǎn)生細(xì)胞毒性,能在細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定存在8小時以上,并刺激細(xì)胞產(chǎn)生免疫應(yīng)答；隨著四面體上負(fù)載的CpG序列數(shù)量增加,免疫刺激性也隨之增強；另外我們還發(fā)現(xiàn),負(fù)載四段CpG序列的四面體能引起更強的免疫刺激效果。我們首次實現(xiàn)了DNA四面體在藥物遞送上的應(yīng)用,并且克服了CpG序列易降解和細(xì)胞攝取率低的問題,為CpG在疾病防治方面的研究提供了新的思路和方法。相信DNA四面體結(jié)構(gòu)也將成為一個有前途的靶向給藥工具。
【關(guān)鍵詞】：CpG序列 DNA四面體 細(xì)胞攝取 細(xì)胞毒性 結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性 免疫刺激
【學(xué)位授予單位】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R392
【目錄】：

• 中文摘要6-7
• ABSTRACT7-9
• 符號及~.略語等的說明9-10
• 第一章 綜述10-36
• 1.1 CpG序列的性質(zhì)、功能與應(yīng)用10-13
• 1.1.1 CpG序列的性質(zhì)10
• 1.1.2 CpG序列的功能與作用機(jī)制10-12
• 1.1.3 CpG序列的應(yīng)用12-13
• 1.2 CpG序列與納米材料13-22
• 1.2.1 CpG藥用研究的瓶頸14
• 1.2.2 CpG對載體性質(zhì)的要求14-15
• 1.2.3 CpG與無機(jī)納米材料15-17
• 1.2.4 CpG與陽離子脂質(zhì)體/聚合物17-18
• 1.2.5 DNA納米材料與CpG18-21
• 1.2.6 納米材料載帶CpG的前景展望21-22
• 1.3 DNA四面體22-27
• 1.3.1 DNA納米材料的發(fā)展22-24
• 1.3.2 DNA四面體的設(shè)計、合成與表征24-26
• 1.3.3 DNA四面體的研究進(jìn)展26-27
• 參考文獻(xiàn)27-36
• 第二章 DNA四面體-CpG系統(tǒng)的構(gòu)建及其穩(wěn)定性研究36-50
• 2.1 引言36
• 2.2 儀器與試劑36-38
• 2.2.1 儀器36-37
• 2.2.2 試劑37
• 2.2.3 常用溶液的配置37-38
• 2.3 DNA四面體-CpG復(fù)合結(jié)構(gòu)的設(shè)計38-39
• 2.4 DNA四面體-CpG復(fù)合結(jié)構(gòu)的合成與表征39-44
• 2.4.1 DNA的定量39-40
• 2.4.2 DNA四面體-CpG的合成40-41
• 2.4.3 DNA四面體-CpG的表征41-44
• 2.5 DNA四面體結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性研究44-47
• 2.5.1 DNA四面體體外抗降解實驗44
• 2.5.2 DNA四面體結(jié)構(gòu)細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定性研究44-47
• 2.6 小結(jié)47
• 參考文獻(xiàn)47-50
• 第三章 DNA四面體-CpG復(fù)合結(jié)構(gòu)免疫效應(yīng)的研究50-64
• 3.1 引言50
• 3.2 儀器與試劑50-53
• 3.2.1 儀器50-51
• 3.2.2 試劑51-52
• 3.2.3 常用溶液配置52-53
• 3.3 實驗方法53-55
• 3.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)53
• 3.3.2 激光共聚焦顯微鏡成像53
• 3.3.3 流式細(xì)胞檢測53-54
• 3.3.4 ELISA54-55
• 3.3.5 MTT55
• 3.4 DNA四面體細(xì)胞攝取效率研究55-57
• 3.4.1 激光共聚焦顯微鏡成像研究DNA四面體細(xì)胞攝取56
• 3.4.2 流式細(xì)胞分析DNA四面體細(xì)胞攝取效率56-57
• 3.5 DNA四面體-CpG細(xì)胞毒性研究57-58
• 3.6 DNA四面體-CpG免疫效應(yīng)的研究58-60
• 3.6.1 不同價態(tài)DNA四面體-CpG的免疫效應(yīng)58-59
• 3.6.2 不同濃度DNA四面體-CpG的免疫效應(yīng)59
• 3.6.3 對TLR9下游通路其它細(xì)胞因子分泌的影響59-60
• 3.7 小結(jié)60-61
• 參考文獻(xiàn)61-64
• 致謝64-66
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文66

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 ;Electrochemical single nucleotide polymorphisms genotyping on surface immobilized three-dimensional branched DNA nanostructure[J];Science China(Chemistry);2011年08期

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本文編號：838792