本文關(guān)鍵詞：流感H3N2納米乳佐劑優(yōu)化及影響因素研究

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【摘要】：流感病毒能引起人類和動物急性呼吸道傳染病,其傳染性強(qiáng),傳播速度快,容易引起在世界范圍內(nèi)的廣泛流行,是嚴(yán)重危害人類健康及社會安全的重要病原體之一。流感病毒可分為甲(A)、乙(B)、丙(C)三型,其中甲型流感病毒的抗原性較易發(fā)生變異,是多次世界性的流感大流行的主要致病型別,導(dǎo)致大量人員死亡,造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。 目前預(yù)防流感的主要手段是接種疫苗,傳統(tǒng)流感疫苗主要以雞胚為生產(chǎn)基質(zhì),由于其生產(chǎn)工藝繁雜,生產(chǎn)成本高,在儲備不足或致病亞型突變的情況下,很難應(yīng)對流感大流行爆發(fā)。在傳統(tǒng)的流感疫苗中加入佐劑能增強(qiáng)抗原的免疫原性,顯著降低疫苗的抗原用量,既節(jié)約疫苗生產(chǎn)成本,又能有效應(yīng)對流感爆發(fā)。 納米乳是一類由表面活性劑、助表面活性劑、油相、水相按一定比例混合形成的透明、澄清、穩(wěn)定的運(yùn)載系統(tǒng)。納米乳作為載藥系統(tǒng)已有大量研究,但作為疫苗佐劑則研究的較少�，F(xiàn)已有AF03等乳佐劑被批準(zhǔn)用于人體,以應(yīng)對傳染性疾病的爆發(fā),AFO3是目前唯一被批準(zhǔn)用于人體的納米乳佐劑。 在本實(shí)驗室已有配方的基礎(chǔ)上,改良配方后形成新的納米乳系統(tǒng)。通過對載水量、乳化劑、油相的優(yōu)化,獲得了安全、穩(wěn)定、有效的最適配方,另一方面通過對不同粒徑大小、顆粒密度、載苗方式的佐劑效果比較,探究影響佐劑效果的直接因素。 第一部分納米乳載水量的優(yōu)化 在實(shí)驗室已有配方的基礎(chǔ)上,進(jìn)行Km值和乳化劑+助乳化劑與油相質(zhì)量比的初步優(yōu)化,篩選出透明穩(wěn)定,能被水無限稀釋的配方A (Tween80, Span80,：1,2-丙二醇：7#白油)及配方D (Tween20, Span80,：1,2-丙二醇：7#白油)。在此基礎(chǔ)上,將其配制成載水66.7%、80%、85.7%的納米乳,測其性質(zhì)后進(jìn)行動物實(shí)驗,檢測HI抗體,篩選出佐劑效果好的納米乳,進(jìn)行IgG、IgG1、IgG2a、IL-4、IFN-γ水平檢測。不同載水量的納米乳佐劑效果不同,載水80%和85.7%的納米乳佐劑效果較好。原因可能在于,納米顆粒穩(wěn)定形成后,水主要起稀釋作用,不同的載水量主要影響納米顆粒的密度從而產(chǎn)生不同的佐劑效果,對于特定的納米乳配方應(yīng)該存在一個最適載水量,將已形成的納米乳顆粒稀釋到合適的程度從而達(dá)到佐劑效果最佳。本實(shí)驗結(jié)合安全性及有效性考慮,選擇85.7%的載水量作為最適載水量進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗。 第二部分載苗方式優(yōu)化 載苗方式主要是比較吸附方式(方式二)和包裹方式(方式四)激發(fā)免疫反應(yīng)的強(qiáng)度不同,吸附方式是先加水形成穩(wěn)定的納米乳顆粒,最后加入的抗原將存在于水相中吸附于納米顆粒表面,而包裹方式則是先加入疫苗液形成納米乳顆粒包裹抗原的形式,最后加入再加適量的水,將其稀釋進(jìn)行動物實(shí)驗。結(jié)果吸附方式表現(xiàn)出強(qiáng)的佐劑效果,而包裹方式則不及吸附方式載苗的免疫反應(yīng)水平,甚至完全不表現(xiàn)出佐劑效果,其機(jī)理有待進(jìn)一步研究。第三部分納米乳乳化劑及油相的優(yōu)化 研究表明,乳化劑和油相種類及比例對于納米乳顆粒大小,顆粒密度有重大影響。本實(shí)驗的乳化劑采用復(fù)合成分,固定Span80的量,比較Tween20, Tween80, EL三者成乳后的性質(zhì)及佐劑效果；油相的優(yōu)化是在固定乳化劑與助乳化劑用量的基礎(chǔ)上,形成載水85.7%的納米乳,比較白油,IPM,大豆油,葡萄籽油成乳后性質(zhì)的不同及動物實(shí)驗中佐劑效果的差異。結(jié)果表明,Tween20或Tween80成乳后佐劑效果更好,白油及IPM成乳后也表現(xiàn)出較好的佐劑效果。粒徑較小的配方佐劑效果明顯,而粒徑大于100nm的幾種配方則無佐劑效果甚至產(chǎn)生免疫抑制作用。因此,粒徑大小是影響佐劑效果的因素之一。綜合考慮穩(wěn)定性,均勻度,安全性及有效性,篩選出配方D:Tween80, Span80,:1,2-丙二醇：7#白油=1：1：2：1為最佳配方。
【關(guān)鍵詞】：流感疫苗 佐劑 優(yōu)化 影響因素
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-13
• 第一部分 載水量的優(yōu)化13-31
• 一. 實(shí)驗器材及試劑13-15
• 二. 實(shí)驗方法15-18
• 1. 納米乳最適載水量的確定15
• 2. 納米乳質(zhì)量評價15-17
• 3. 動物實(shí)驗評價納米乳佐劑效果17-18
• 4. 安全性評價18
• 三. 實(shí)驗結(jié)果與分析18-29
• 1. 最適載水量的確定18-21
• 2. 納米乳性質(zhì)測定21-24
• 3. 動物實(shí)驗評價納米乳佐劑效果24-28
• 4. 安全性評價28-29
• 四. 討論29-30
• 五. 結(jié)論30-31
• 第二部分 載苗方式的優(yōu)化31-38
• 一. 實(shí)驗器材及試劑31-32
• 二. 實(shí)驗步驟與方法32-33
• 1. 方式二搭載疫苗的納米乳配制32
• 2. 方式四搭載疫苗的納米乳配制32-33
• 3. 動物實(shí)驗評價納米乳佐劑效果33
• 三. 實(shí)驗結(jié)果與分析33-36
• 1. 方式二搭載流感疫苗33-34
• 2. 方式四搭載流感疫苗34
• 3. 動物實(shí)驗34-36
• 四. 討論36-37
• 五. 結(jié)論37-38
• 第三部分 乳化劑及油相的優(yōu)化38-53
• 一. 實(shí)驗器材及試劑39-41
• 二. 實(shí)驗方法41-42
• 1. 乳化劑和油相的優(yōu)化41
• 2. 性質(zhì)測定41
• 3. 動物實(shí)驗41-42
• 4. 安全性評價42
• 三. 結(jié)果及分析42-51
• 1. 乳化劑和油相的優(yōu)化42-46
• 2. 性質(zhì)測定46-47
• 3. 動物實(shí)驗47-49
• 4. 安全性評價49-51
• 四. 討論51-52
• 五. 結(jié)論52-53
• 總結(jié)53-54
• 參考文獻(xiàn)54-59
• 附錄59-64
• 致謝64-65
• 個人簡歷65-66

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：834181