本文關鍵詞：應用慢病毒系統(tǒng)建立高表達FTO蛋白的SV-HUC-1穩(wěn)定細胞株

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【摘要】：目的:構建慢病毒轉染的肥胖相關基因(fat mass and obesity associated gene,FTO)高表達體系,并建立穩(wěn)定、高效、長久高表達FTO的人永生化膀胱移行上皮SV-HUC-1穩(wěn)定細胞株,為研究FTO基因在膀胱癌發(fā)生及進展中的作用打下基礎。方法:從SV-HUC-1細胞提取總RNA,逆轉錄合成cDNA。以cDNA為模板應用PCR技術擴增FTO編碼基因,將其連接入PLEX-puro表達載體(PLEX-puro-FTO),并轉化至感受態(tài)大腸桿菌JM109中。對氨芐青霉素和博來霉素雙重篩選的陽性克隆進行測序,鑒定插入正確后抽提質粒,將陽性重組質粒導入病毒包裝細胞293T中;收集病毒上清液轉染SV-HUC-1細胞,48小時后加入終濃度1μg/ml的嘌呤霉素進行藥物篩選,10天后得到穩(wěn)定細胞株,用Western blot測定轉染后SV-HUC-1細胞中FTO蛋白的表達水平。結果:測序結果證實目的片斷正確插入PLEX表達載體中,成功構建了PLEX-puro-FTO高表達載體;穩(wěn)定轉染高表達載體SV-HUC-1細胞的FTO蛋白表達顯著高于轉染空載體細胞。結論:成功構建了PLEX-puroFTO重組慢病毒質粒,并獲得FTO蛋白高表達的SV-HUC-1穩(wěn)定細胞株。
【作者單位】： 廣州醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院放療科 廣東省泌尿外科重點實驗室;中山大學附屬第一醫(yī)院;
【關鍵詞】： 肥胖相關基因 膀胱癌 穩(wěn)定細胞株
【基金】：國家自然科學基金(編號81272350,81472999) 廣東省自然科學基金(編號S2012010008908) 廣州市教育局基金(編號12A015G)
【分類號】：R373
【正文快照】： 肥胖相關基因(fat mass and obesity associat-ed gene,FTO)是目前科學界找到的第一個確切與廣泛人群肥胖有關的基因〔1~3〕。據(jù)報道FTO與心血管疾病〔4〕,Ⅱ型糖尿病〔5〕和乳腺癌〔6〕等多種疾病密切相關。生物信息學分析顯示,FTO基因位于人類第16號染色體(16q12.2)上,含有9

【共引文獻】

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【相似文獻】

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本文編號：833914