發(fā)布時間：2017-09-12 00:15

  本文關(guān)鍵詞：應(yīng)用慢病毒系統(tǒng)建立高表達FTO蛋白的SV-HUC-1穩(wěn)定細胞株

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【摘要】：目的:構(gòu)建慢病毒轉(zhuǎn)染的肥胖相關(guān)基因(fat mass and obesity associated gene,FTO)高表達體系,并建立穩(wěn)定、高效、長久高表達FTO的人永生化膀胱移行上皮SV-HUC-1穩(wěn)定細胞株,為研究FTO基因在膀胱癌發(fā)生及進展中的作用打下基礎(chǔ)。方法:從SV-HUC-1細胞提取總RNA,逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。以cDNA為模板應(yīng)用PCR技術(shù)擴增FTO編碼基因,將其連接入PLEX-puro表達載體(PLEX-puro-FTO),并轉(zhuǎn)化至感受態(tài)大腸桿菌JM109中。對氨芐青霉素和博來霉素雙重篩選的陽性克隆進行測序,鑒定插入正確后抽提質(zhì)粒,將陽性重組質(zhì)粒導(dǎo)入病毒包裝細胞293T中;收集病毒上清液轉(zhuǎn)染SV-HUC-1細胞,48小時后加入終濃度1μg/ml的嘌呤霉素進行藥物篩選,10天后得到穩(wěn)定細胞株,用Western blot測定轉(zhuǎn)染后SV-HUC-1細胞中FTO蛋白的表達水平。結(jié)果:測序結(jié)果證實目的片斷正確插入PLEX表達載體中,成功構(gòu)建了PLEX-puro-FTO高表達載體;穩(wěn)定轉(zhuǎn)染高表達載體SV-HUC-1細胞的FTO蛋白表達顯著高于轉(zhuǎn)染空載體細胞。結(jié)論:成功構(gòu)建了PLEX-puroFTO重組慢病毒質(zhì)粒,并獲得FTO蛋白高表達的SV-HUC-1穩(wěn)定細胞株。
【作者單位】： 廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院放療科 廣東省泌尿外科重點實驗室;中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院;
【關(guān)鍵詞】： 肥胖相關(guān)基因 膀胱癌 穩(wěn)定細胞株
【基金】：國家自然科學(xué)基金(編號81272350,81472999) 廣東省自然科學(xué)基金(編號S2012010008908) 廣州市教育局基金(編號12A015G)
【分類號】：R373
【正文快照】： 肥胖相關(guān)基因(fat mass and obesity associat-ed gene,FTO)是目前科學(xué)界找到的第一個確切與廣泛人群肥胖有關(guān)的基因〔1~3〕。據(jù)報道FTO與心血管疾病〔4〕,Ⅱ型糖尿病〔5〕和乳腺癌〔6〕等多種疾病密切相關(guān)。生物信息學(xué)分析顯示,FTO基因位于人類第16號染色體(16q12.2)上,含有9

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 Stella Chai;Stephanie Ma;;Clinical implications of microRNAs in liver cancer stem cells[J];癌癥(英文版);2013年08期

2 奉夏平;曾憲遠;付麗敏;唐麗娜;黃秀麗;陳清清;;高效液相色譜法測定柑橘中6種防腐保鮮劑的殘留[J];現(xiàn)代食品科技;2013年08期

3 蔣國燕;李瑾;施露;曹進;張獻全;;RNAi沉默MACC1基因表達抑制乳腺癌MCF-7細胞增殖和遷移[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2013年18期

4 徐秋月;張艷亮;段勇;;微陣列比較基因組雜交技術(shù)及其在腫瘤拷貝數(shù)變化研究中的應(yīng)用進展[J];國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志;2013年18期

5 梁冰;王們;冼磊;李琴;;廣西某醫(yī)院壯族肺癌患者住院情況調(diào)查[J];應(yīng)用預(yù)防醫(yī)學(xué);2013年04期

6 任冠華;范亞光;趙永成;周清華;;低劑量螺旋CT肺癌篩查研究進展[J];中國肺癌雜志;2013年10期

7 王蕾;寧小曉;李和根;徐蔚杰;周蕾;許玲;;可溶性B7H3分子在肺癌患者血清中的表達及其臨床意義[J];國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志;2013年22期

8 Sirio Fiorino;;HBV and HCV infection and pancreatic ductal adenocarcinoma[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2013年06期

9 趙艷;楊曼;祁興順;韓國宏;樊代明;;索拉非尼不良反應(yīng)對其療效的預(yù)測價值[J];醫(yī)學(xué)爭鳴;2013年05期

10 劉婧婧;畢明宏;;RET融合基因在非小細胞肺癌診治中的意義[J];中國肺癌雜志;2013年11期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 劉璐;;絕經(jīng)后激素治療與卵巢癌發(fā)病風(fēng)險[A];第十一屆全國博士生學(xué)術(shù)年會（生物醫(yī)藥專題）論文集（下冊，，墻報P25-P48）[C];2013年

2 劉敏霞;周可成;曹毅;;新的肺癌相關(guān)基因MCRS1病理生理功能研究[A];第十六屆中國科協(xié)年會——分3環(huán)境污染及職業(yè)暴露與人類癌癥學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2014年

3 肖麗君;趙爽;鄭華川;趙恩宏;鄭鑫;;Parafibromin在胃腸道癌中的表達及與臨床病理學(xué)因素的關(guān)系[A];第十六屆中國科協(xié)年會——分13感染、免疫和疫苗論壇論文集[C];2014年

4 付文婷;王科燕;王曉梅;;門診化療臨床藥師服務(wù)的切入點[A];第十三屆全國青年藥師成才之路論壇暨抗腫瘤藥物合理應(yīng)用與臨床藥學(xué)實踐國家級繼教會議論文集[C];2014年

5 吳天石;王艷杰;郭雋馥;徐寧陽;王榮;金穎;唱云鳳;馬麗娜;;四君子丸對Lewis肺癌小鼠腫瘤組織增殖及凋亡的影響[A];第四次中華中醫(yī)藥科技成果論壇論文集[C];2014年

6 王芳;趙玲莉;;亞高原西寧地區(qū)腫瘤標志物CA72-4、CA24-2、CEA聯(lián)合檢測對胃癌早期診斷的評價分析[A];中國轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)和整合醫(yī)學(xué)研討會（廣州站）論文綜合刊[C];2015年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 閆實;低劑量放療誘導(dǎo)宮頸癌上皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)化分子機制的研究[D];山東大學(xué);2013年

2 周紅艷;胃癌中ER-α36與EGFR信號傳導(dǎo)通路的研究[D];華中科技大學(xué);2013年

3 鄢文;microRNA-19促進人肺腺癌細胞株A549向間充質(zhì)細胞轉(zhuǎn)化[D];南方醫(yī)科大學(xué);2011年

4 姚堯;胰腺癌與環(huán)境、疾病、心理行為因素病例對照研究以及相關(guān)遺傳易感性研究初探[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

5 何玉琦;雌激素誘導(dǎo)結(jié)腸癌細胞凋亡的表觀遺傳機制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

6 何斐;炎癥信號通路基因多態(tài)性、環(huán)境因素及肺炎衣原體感染與原發(fā)性肺癌易感性及預(yù)后研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2013年

7 袁明洲;慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾RPMI-8226細胞MIC-1表達抑制破骨細胞成熟的實驗研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2013年

8 徐鋒;SDF-1/CXCR4和TECK/CCR9與胰腺癌預(yù)后不良相關(guān)性研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2013年

9 馬振桓;~(125)I粒子對胃癌移植瘤細胞增殖、凋亡和基因表達的影響[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2013年

10 周永春;轉(zhuǎn)錄因子Sox4在云南宣威女性肺癌中的表達及作用機制研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 艾相昭;基于量子點構(gòu)建的光學(xué)傳感器在生物醫(yī)學(xué)分析中的應(yīng)用[D];吉林大學(xué);2013年

2 徐亞;內(nèi)鏡黏膜下剝離術(shù)在消化道上皮內(nèi)瘤變中診治價值的初步探討[D];蘇州大學(xué);2013年

3 阿米尼姑麗·買買提;維吾爾族婦女宮頸癌及癌前病變血漿代謝組分研究[D];新疆大學(xué);2013年

4 黃景思;肺腺癌中Fas、HDAC1的表達與組蛋白乙�；降南嚓P(guān)性研究[D];蘇州大學(xué);2013年

5 王冠;新型抗腫瘤候選化合物L(fēng)41大鼠體內(nèi)藥代動力學(xué)研究[D];山東大學(xué);2013年

6 張磊;慢性病社區(qū)干預(yù)效果及影響因素研究[D];山東大學(xué);2013年

7 陳甜甜;泰興地區(qū)食管癌發(fā)病趨勢及家族聚集性研究[D];山東大學(xué);2013年

8 何依珊;35歲以下乳腺癌患者臨床特點及分子亞型特性比較[D];鄭州大學(xué);2013年

9 劉會鋒;MiR-143對腎癌細胞株A498增殖及凋亡影響的研究[D];鄭州大學(xué);2013年

10 鞏姣梅;宮頸癌篩查新技術(shù)研究[D];鄭州大學(xué);2013年

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 黃亮;唐正嚴;李東杰;王桂林;黃珂;周杰;黎勇林;高本敏;陳俊杰;;氯胺酮誘導(dǎo)人膀胱SV-HUC-1細胞凋亡的實驗研究[J];中南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2014年07期

本文編號：833914