本文關(guān)鍵詞：β-hCG單克隆抗體的集成分離純化

  更多相關(guān)文章： 雙水相體系 β-hCG單克隆抗體 磺胺二甲基嘧啶 分離純化

【摘要】：β-hCG單克隆抗體己廣泛應(yīng)用于妊娠反應(yīng)以及妊娠相關(guān)疾病的檢測中,因此分離純化制備高純度的β-hCG單克隆抗體具有重要的應(yīng)用價(jià)值。親和雙水相萃取是將雙水相萃取和親和分配相集成,兼具兩者的優(yōu)點(diǎn),是一種前景良好的新型分離方法,已廣泛應(yīng)用于生物活性物質(zhì)的分離純化中。 本論文首先研究了β-hCG單克隆抗體在以磺胺二甲基嘧啶(SM2)作為親和配基的PEG/檸檬酸鈉雙水相體系中的分配效果,通過對(duì)PEG分子量及濃度、PEG-SM2加入量、檸檬酸鈉濃度、pH值、抗體加入量等因素的考察,得到較優(yōu)的分配體系組成：PEG40009%, PEG-SM28%,檸檬酸鈉濃度12%,NaCl濃度3%,pH6.0,抗體加入量0.5mg/g,在該體系下,分配系數(shù)可達(dá)到7.6,收率為91.1%,且抗體效價(jià)基本沒有損失。 在此研究基礎(chǔ)上,開展了該親和雙水相體系直接對(duì)小鼠腹水中β-hCG單抗的純化研究。結(jié)果表明,若進(jìn)行單次萃取,則得到的β-hCG單抗純度較低(P=36.8%),且不隨萃取級(jí)數(shù)增加而改變；若采用二次萃取,先用PEG10000(5%)/檸檬酸鈉(8%)的雙水相體系對(duì)小鼠腹水進(jìn)行萃取,分配完全后將上下相分離,在下相的基礎(chǔ)上重新構(gòu)建親和雙水相體系進(jìn)行二次萃取,得到的抗體純度大于82.1%,收率81.7%,純化因子為5.3。
【關(guān)鍵詞】：雙水相體系 β-hCG單克隆抗體 磺胺二甲基嘧啶 分離純化
【學(xué)位授予單位】：浙江工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 第一章 緒論10-26
• 1.1 hCG單克隆抗體10-11
• 1.2 抗體的分離純化11-16
• 1.2.1 沉淀法12-13
• 1.2.2 色譜法13-16
• 1.3 雙水相萃取技術(shù)16-22
• 1.3.1 雙水相體系的形成17-18
• 1.3.2 雙水相萃取的原理18-20
• 1.3.3 雙水相萃取的優(yōu)點(diǎn)20-21
• 1.3.4 雙水相萃取的應(yīng)用21-22
• 1.4 雙水相萃取與相關(guān)技術(shù)的集成化22-25
• 1.4.1 分離過程的集成化22-23
• 1.4.2 親和雙水相體系23-24
• 1.4.3 抗體純化中親和配基的選擇24-25
• 1.5 本論文研究內(nèi)容及意義25-26
• 第二章 β-hCG單克隆抗體在親和雙水相體系中的分配26-48
• 2.1 引言26-27
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料及儀器27-28
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料27
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器27-28
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法28-33
• 2.3.1 β-hCG單克隆抗體的制備28
• 2.3.2 PEG-SM2親和聚合物的制備28-29
• 2.3.3 雙水相體系29-31
• 2.3.4 分析方法31-33
• 2.4 結(jié)果與討論33-47
• 2.4.1 β-hCG單克隆抗體的制備33-34
• 2.4.2 PEG-SM2親和聚合物的結(jié)構(gòu)鑒定34-36
• 2.4.3 β-hCG單克隆抗體在親和雙水相體系中的分配36-47
• 2.5 小結(jié)47-48
• 第三章 雙水相萃取小鼠腹水中的β-hCG單克隆抗體48-63
• 3.1 引言48
• 3.2 實(shí)驗(yàn)材料及儀器48
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法48-52
• 3.3.1 親和雙水相萃取小鼠腹水中的β-hCG單克隆抗體48-49
• 3.3.2 分析方法49-52
• 3.4 結(jié)果與討論52-61
• 3.4.1 親和雙水相萃取小鼠腹水中的β-hCG單克隆抗體52-53
• 3.4.2 多級(jí)萃取小鼠腹水中的β-hCG單克隆抗體53-61
• 3.5 小結(jié)61-63
• 第四章 結(jié)論與展望63-65
• 4.1 結(jié)論63-64
• 4.2 展望64-65
• 參考文獻(xiàn)65-70
• 致謝70-71
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文71

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