本文關(guān)鍵詞：骨橋蛋白對骨髓間充質(zhì)干細胞增殖及遷移功能的影響研究

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【摘要】：目的： 本實驗分別利用OPN慢病毒及蛋白處理骨髓間充質(zhì)干細胞，檢測內(nèi)源性及外源性O(shè)PN表達差異導致的骨髓間充質(zhì)干細胞增殖及遷移功能的變化，，從而比較OPN對骨髓間充質(zhì)干細胞功能的影響。 方法： 1.分別分離培養(yǎng)新生OPN基因敲除型及野生型C57BL/6小鼠(鼠齡一天)的骨髓間充質(zhì)干細胞。培養(yǎng)后行流式、PCR、WB鑒定； 2.提取野生型成年小鼠OPN基因后構(gòu)建OPN質(zhì)粒并通過氯化鈣-氯喹法進行慢病毒包裝； 3.慢病毒感染細胞，并行定量PCR及WB檢測各細胞內(nèi)OPN表達量的變化。 4.分別利用外源性O(shè)PN蛋白及OPN慢病毒處理細胞后用CCK8法檢測細胞的增殖能力改變。 5.同樣分組利用Transwell小室檢測骨髓間充質(zhì)干細胞遷移能力變化。 結(jié)果： 1.鏡下見骨髓內(nèi)分離的細胞生長狀態(tài)良好，呈漩渦狀排列。流式細胞儀檢測示細胞純度高，PCR、WB鑒定結(jié)果顯示OPN基因敲除型小鼠無OPN基因及蛋白的表達，而野生型小鼠可正常表達； 2.從成年小鼠腎臟提取的OPN基因長度約為900bp。將此基因片段插入慢病毒載體后，經(jīng)氯化鈣-氯喹方法進行質(zhì)粒包裝后獲得滴度為2.5×108TU/ml的含OPN基因片段的慢病毒及空載體慢病毒； 3.慢病毒分別感染基因敲除型及野生型小鼠的骨髓間充質(zhì)干細胞后熒光鏡下可細胞均有熒光產(chǎn)生，經(jīng)定量PCR及WB檢測OPN呈梯度表達； 4.CCK8檢測結(jié)果提示無論是外源性O(shè)PN蛋白作用還是內(nèi)源性O(shè)PN基因作用，均能提高骨髓間充質(zhì)干細胞的增殖能力； 5.Transwell小室遷移實驗顯示外源性及內(nèi)源性O(shè)PN表達的增高均能導致骨髓間充質(zhì)干細胞遷移能力的增強。 結(jié)論： 內(nèi)源性及外源性骨橋蛋白均能夠促進骨髓間充質(zhì)干細胞的增殖及遷移功能。
【關(guān)鍵詞】：骨橋蛋白 骨髓間充質(zhì)干細胞 增殖 遷移
【學位授予單位】：蚌埠醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 第一部分 前言10-12
• 第二部分 骨髓間充質(zhì)干細胞的分離培養(yǎng)及鑒定12-23
• 2.1 材料及方法12-18
• 2.2 結(jié)果18-21
• 2.3 討論21-23
• 第三部分 OPN 質(zhì)粒的構(gòu)建及慢病毒包裝23-33
• 3.1 材料及方法23-28
• 3.2 結(jié)果28-31
• 3.3 討論31-33
• 第四部分 慢病毒感染骨髓間充質(zhì)干細胞及鑒定33-38
• 4.1 材料及方法33-35
• 4.2 結(jié)果35-37
• 4.3 討論37-38
• 第五部分 骨橋蛋白對骨髓間充質(zhì)干細胞增殖功能的影響38-42
• 5.1 材料及方法38-39
• 5.2 結(jié)果39-41
• 5.3 討論41-42
• 第六部分 骨橋蛋白對骨髓間充質(zhì)干細胞遷移功能的影響42-47
• 6.1 材料及方法42-43
• 6.2 結(jié)果43-46
• 6.3 討論46-47
• 全文結(jié)論47-48
• 參考文獻48-50
• 致謝50-51
• 附錄51
• 英文注解51-52
• 個人簡歷52-53
• 攻讀學位期間發(fā)表文章情況53-54
• 小綜述54-60
• 參考文獻57-60

【參考文獻】

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本文編號：762850