本文關(guān)鍵詞：臍帶間充質(zhì)干細胞移植前細胞活性評價指標(biāo)的研究

  更多相關(guān)文章： 間充質(zhì)干細胞 細胞移植 細胞活性 克隆形成率

【摘要】：背景： 人臍帶來源間充質(zhì)干細胞（human umbilical cord derived mesenchymal stemcells, hUC-MSCs）憑借其組織來源廣泛、含量豐富、不受倫理限制等優(yōu)勢成為間充質(zhì)干細胞的理想來源,是目前干細胞移植的熱點。UC-MSCs作為一種動態(tài)的活細胞，移植前細胞活性對治療效果的影響最為直接。目前移植前細胞活性檢測指標(biāo)通常采用經(jīng)典臺盼藍染色法。但是由于易受主觀因素的影響，并且其檢測針對的是細胞膜完整性，僅僅是細胞生理狀態(tài)的一部分，并不能時時地準確反映細胞整體功能，從而影響對臨床應(yīng)用的指導(dǎo)意義。因此，探尋一種可準確反映細胞功能狀態(tài)的活性指標(biāo)，將會大大促進間充質(zhì)干細胞在臨床疾病治療、科學(xué)研究方面的發(fā)展。 目的： 通過對多種具有代表性的細胞活性測定方法進行比較，探尋可準確反映細胞功能狀態(tài)的活性指標(biāo)，篩選出一定條件下能夠真實反映移植前細胞狀態(tài)的活性指標(biāo)，為UC-MSCs臨床應(yīng)用提供指導(dǎo)。 方法： 1.體外分離培養(yǎng)人臍帶間充質(zhì)干細胞，細胞免疫學(xué)表型鑒定，成骨成脂誘導(dǎo)； 2.UC-MSCs的保存：0.9%氯化鈉注射液，4℃條件下保存0h、2h、4h、6h； 3.評估人工活性測定方法（臺盼藍法、TUNEL、Live-Dead Assay、貼壁實驗）的準確性； 4.采用多種具有代表性的細胞活性測定方法（臺盼藍染色法、Annexin V-PI、TUNEL、CCK-8、Live-Dead Assay、貼壁實驗）檢測保存后細胞存活率； 5.對細胞存活率與反應(yīng)細胞功能狀態(tài)指標(biāo)CFE進行相關(guān)性分析； 6.對貼壁實驗在不同觀察者之間的可靠性進行統(tǒng)計學(xué)分析。 結(jié)果： 1.針對0.9%生理鹽水保存不同時間點（0h、2h、4h、6h）的UC-MSCs進行活性檢測，，人工檢測方法（臺盼藍染色法、TUNEL、Live-Dead Assay、貼壁實驗）之間最大測量差值大約分別是1.46%、6.89%、8.23%、8.94%，均小于10%的統(tǒng)計誤差； 2.在UC-MSCs保存0h時，臺盼藍染色法同其它幾種經(jīng)典活性測定方法（Annexin V-PI、TUNEL、CCK-8、Live-DeadAssay、貼壁實驗）比較，結(jié)果相似，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，而對于保存一定時間后UC-MSCs，細胞活力則具有顯著性差異； 3.觀察保存后細胞存活率與反應(yīng)其功能狀態(tài)指標(biāo)CFE之間的關(guān)聯(lián)程度，采用臺盼藍染色法測得的活細胞比例與CFE的相關(guān)性為r2=0.893，而其它的檢測方法（Annexin V-PI、TUNEL、CCK-8、Live-DeadAssay、貼壁實驗）測得的活細胞比例與CFE則具有較好的的相關(guān)性（分別為r2=0.935、0.949、0.924、0.947、0.982），其中貼壁實驗的相關(guān)系數(shù)最高； 4.貼壁實驗作為一種人工活性檢測方法，其結(jié)果的可靠性存在爭議。采用其進行活力分析時，5個觀察者測得的活性數(shù)據(jù)不存在顯著性差異，具有較好的一致性。 結(jié)論： 1.采用幾種經(jīng)典測定方法（臺盼藍染色法、Annexin V-PI、TUNEL、CCK-8、Live-Dead Assay、貼壁實驗）檢測細胞活力時，臺盼藍染色法適用于即刻細胞活力的檢測； 2.對于經(jīng)過保存之后的細胞，臺盼藍法過高的估計了細胞功能，其他活性檢測方法則可以較之相對精確，而其中貼壁實驗則是目前眾多檢測細胞活性方法中相對較為精確的； 3.觀察者的差異性并不會影響貼壁實驗結(jié)果的可靠性。
【關(guān)鍵詞】：間充質(zhì)干細胞 細胞移植 細胞活性 克隆形成率
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• Abstract9-12
• 英文縮略詞表12-13
• 前言13-15
• 第一章 材料與方法15-30
• 1.1 實驗材料15-22
• 1.1.1 臍帶來源15
• 1.1.2 主要實驗試劑15-16
• 1.1.3 主要實驗耗材16-17
• 1.1.4 主要儀器17-18
• 1.1.5 溶液配制18-22
• 1.2 實驗方法22-30
• 1.2.1 臍帶標(biāo)本的采集22
• 1.2.2 UC-MSCs 的制備22
• 1.2.3 UC-MSCs 的原代、傳代培養(yǎng)及細胞凍存22-23
• 1.2.4 細胞計數(shù)23-24
• 1.2.5 UC-MSCs 的鑒定24-25
• 1.2.6 UC-MSCs 的保存25
• 1.2.7 保存后 UC-MSCs 活性測定25-29
• 1.2.8 UC-MSCs 克隆形成能力的檢測29
• 1.2.9 統(tǒng)計學(xué)分析29-30
• 第二章 實驗結(jié)果30-43
• 2.1 UC-MSCs 原代培養(yǎng)細胞生長情況及光鏡下形態(tài)30
• 2.2 UC-MSCs 鑒定結(jié)果30-34
• 2.3 不同人工活性檢測方法測定經(jīng)保存 UC-MSCs 存活率34
• 2.4 不同檢測方法對 UC-MSC 保存不同時間點測得的細胞活性比較34-35
• 2.5 不同檢測方法對經(jīng)保存 UC-MSCs 活性分析與集落形成率的比較35-42
• 2.6 評估貼壁實驗的可靠性42-43
• 第三章 討論43-47
• 參考文獻47-52
• 綜述52-70
• 參考文獻59-70
• 發(fā)表文章70-71
• 致謝71-72
• 個人簡介72

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 張曦;陳幸華;司英健;劉耀;高蕾;高力;張誠;彭賢貴;王慶余;;人臍血源基質(zhì)細胞移植促進裸鼠造血損傷修復(fù)的實驗研究[J];重慶醫(yī)學(xué);2007年17期

2 高力;張曦;高蕾;陳幸華;;不同來源基質(zhì)細胞對骨髓瘤KM3細胞增殖和凋亡的影響[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2009年10期

3 劉陽;賴翼;李敏惠;楊淑霞;鄭靜;陽泰;李麗梅;鄧勇;張強;任榮梅;李錢梅;張帥;鄒強;李華;;流式細胞術(shù)檢測細胞存活率的方法學(xué)建立[J];國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志;2011年15期

4 孫國棟;李志忠;王晶;林永新;洪亮;吳波文;焦根龍;邵建立;;人臍帶間充質(zhì)干細胞的分離培養(yǎng)及向成骨成脂分化的實驗研究[J];西安交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2010年02期

5 孫曉娟;楊乃龍;;成人與胎兒骨髓間充質(zhì)干細胞生物學(xué)性狀的比較[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2009年14期

6 王

本文編號：754180