本文關(guān)鍵詞：植物內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)物中單胺氧化酶抑制劑的研究

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【摘要】：內(nèi)生真菌是一類生活于健康植物細胞內(nèi)或細胞間，并且不會造成植物明顯疾病癥狀的真菌。在與宿主長期共生的過程中，內(nèi)生真菌會產(chǎn)生種類多樣的代謝產(chǎn)物。這些代謝產(chǎn)物有著廣泛的生物活性，如抗菌、抗病毒、抗氧化、抗腫瘤、免疫抑制等，為尋找新藥及新藥先導化合物提供了寶貴的資源。 單胺氧化酶（Monoamine Oxidase，MAO）對體內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)的代謝有著重要的作用。體內(nèi)MAO異常升高與抑郁癥及神經(jīng)退行性疾病如帕金森病和阿爾茲海默癥的發(fā)生有關(guān)。選擇性MAO抑制劑是治療抑郁癥和神經(jīng)退行性疾病的重要藥物。研究者們已經(jīng)從天然產(chǎn)物中發(fā)現(xiàn)了多種選擇性MAO抑制劑，這些天然產(chǎn)物具有成為新一代治療抑郁癥、帕金森病、阿爾茲海默癥藥物的潛力。目前，天然產(chǎn)物MAO抑制劑的來源主要為植物，有關(guān)從微生物代謝產(chǎn)物獲得MAO抑制劑的報道極少。因此，從內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)物中尋找MAO抑制劑有著廣闊的前景。 本研究從17種藥用植物中分離得到147株內(nèi)生真菌，分屬于14個屬，其中數(shù)量最多的3個屬分別為曲霉屬（Aspergillus）、鐮刀菌屬（Fusarium）和鏈格孢霉屬（Alternaria）。 以147株內(nèi)生真菌發(fā)酵液的乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物為樣本，篩選具有MAO抑制活性的發(fā)酵產(chǎn)物。有5株真菌的發(fā)酵產(chǎn)物有著較強的MAO抑制作用，抑制率大于50%，其中3株真菌發(fā)酵產(chǎn)物的IC50值在200μg/ml左右。選擇1株分離自長柱金絲桃的內(nèi)生真菌E160作為進一步研究對象，利用形態(tài)學和分子生物學方法鑒定菌株E160為煙曲霉（Aspergillus fumigatus）。 菌株E160經(jīng)固體發(fā)酵后得到8.7g乙酸乙酯提取物。抑制MAO的IC50值為195.1μg/ml。利用硅膠柱層析、反相ODS柱層析分離，薄層色譜檢測，高效液相色譜分析，并通過對MAO抑制活性的追蹤，初步建立了MAO抑制活性物質(zhì)的分離純化體系。獲得一個具有MAO抑制活性的組分EM10-2，抑制MAO的IC50值為51.1μg/ml。對組分EM10-2的MAO選擇性進行檢測，發(fā)現(xiàn)抑制MAO A的IC50值為101.0μg/ml，抑制MAO B的IC50值為22.7μg/ml，，顯示化合物EM10-2對MAO B有一定的選擇性，具有成為MAO選擇性抑制劑的潛力。 對煙曲霉E160的發(fā)酵條件進行優(yōu)化，探討了液體發(fā)酵中培養(yǎng)基碳源、氮源、初始pH值，接種量、裝液量、培養(yǎng)溫度以及培養(yǎng)時間對發(fā)酵產(chǎn)物干重和MAO的抑制率的影響。確定最佳發(fā)酵條件為葡萄糖為碳源、酵母浸粉為氮源，初始pH為6，錐形瓶內(nèi)裝40%的培養(yǎng)基，接種2%（v/v）的1×107CFU/ml的孢子懸液，25℃震蕩培養(yǎng)11d。此時發(fā)酵產(chǎn)物干重為25.9mg，對MAO的抑制率為72.8%，與初始條件相比分別提高了49.7%和25.7%。 本研究為新型天然MAO抑制劑的研究提供了資源菌株，并為從內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)物尋找MAO抑制劑奠定了理論依據(jù)和實驗基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：次級代謝產(chǎn)物 MAO 抑制活性 煙曲霉 條件優(yōu)化
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R379
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 英文縮略詞11-12
• 第1章 緒論12-19
• 1.1 內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)物研究概況12-15
• 1.2 單胺氧化酶及單胺氧化酶抑制劑15-16
• 1.2.1 單胺氧化酶15
• 1.2.2 單胺氧化酶抑制劑15-16
• 1.3 天然產(chǎn)物來源的單胺氧化酶抑制劑16-18
• 1.4 本研究目的意義和主要內(nèi)容18-19
• 1.4.1 目的意義18
• 1.4.2 研究內(nèi)容18-19
• 第2章 具有單胺氧化酶抑制活性代謝產(chǎn)物的篩選19-30
• 2.1 材料與方法19-24
• 2.1.1 材料19-21
• 2.1.2 方法21-24
• 2.2 實驗結(jié)果24-28
• 2.2.1 內(nèi)生真菌的鑒定24-25
• 2.2.2 分光光度法活性初篩25-26
• 2.2.3 分光光度法活性復篩26-27
• 2.2.4 菌株 E160 的形態(tài)學鑒定27
• 2.2.5 菌株 E160 的分子生物學鑒定27-28
• 2.3 討論28-30
• 第3章 菌株 E160 次級代謝產(chǎn)物的研究30-39
• 3.1 材料與方法30-33
• 3.1.1 材料30-31
• 3.1.2 方法31-33
• 3.2 實驗結(jié)果33-37
• 3.2.1 菌株 E160 的固體發(fā)酵33
• 3.2.2 菌株 E160 產(chǎn)物的分離33-34
• 3.2.3 菌株 E160 各組分抑制 MAO 活性的檢測34-35
• 3.2.4 菌株 E160 組分 EM10 紫外（UV）分析結(jié)果35-36
• 3.2.5 組分 EM10 的反相硅膠柱層析36
• 3.2.6 組分 EM10-2 的 GC-MS 分析36-37
• 3.2.7 組分 EM10-2 對 MAO 的選擇性37
• 3.3 討論37-39
• 第4章 菌株 E160 發(fā)酵條件的優(yōu)化39-51
• 4.1 材料與方法39-42
• 4.1.1 材料39-40
• 4.1.1.1 實驗菌株39
• 4.1.1.2 實驗試劑39
• 4.1.1.3 實驗儀器39-40
• 4.1.1.4 培養(yǎng)基和孢子懸液40
• 4.1.2 實驗方法40-42
• 4.1.2.1 菌株發(fā)酵及分析方法40
• 4.1.2.2 不同碳源對發(fā)酵產(chǎn)物量和 MAO 抑制率的影響40-41
• 4.1.2.3 不同氮源對發(fā)酵產(chǎn)物量和 MAO 抑制率的影響41
• 4.1.2.4 初始 pH 對發(fā)酵產(chǎn)物量和 MAO 抑制率的影響41
• 4.1.2.5 接種量對發(fā)酵產(chǎn)物量和 MAO 抑制率的影響41
• 4.1.2.6 裝液量對發(fā)酵產(chǎn)物量和 MAO 抑制率的影響41-42
• 4.1.2.7 培養(yǎng)溫度對發(fā)酵產(chǎn)物量和 MAO 抑制率的影響42
• 4.1.2.8 培養(yǎng)時間對發(fā)酵產(chǎn)物量和 MAO 抑制率的影響42
• 4.1.2.9 最佳條件下發(fā)酵產(chǎn)物干重和 MAO 的抑制率42
• 4.2 實驗結(jié)果42-49
• 4.2.1 初始條件下的發(fā)酵產(chǎn)物干重和 MAO 的抑制活性42
• 4.2.2 不同碳源對發(fā)酵產(chǎn)物量和 MAO 抑制率的影響42-43
• 4.2.3 不同氮源對發(fā)酵產(chǎn)物量和 MAO 抑制率的影響43-44
• 4.2.4 初始 pH 對發(fā)酵產(chǎn)物量和 MAO 抑制率的影響44-45
• 4.2.5 接種量對發(fā)酵產(chǎn)物量和 MAO 抑制率的影響45-46
• 4.2.6 裝液量對發(fā)酵產(chǎn)物量和 MAO 抑制率的影響46-47
• 4.2.7 培養(yǎng)溫度對發(fā)酵產(chǎn)物量和 MAO 抑制率的影響47-48
• 4.2.8 培養(yǎng)時間對發(fā)酵產(chǎn)物量和 MAO 抑制率的影響48-49
• 4.2.9 最佳條件下發(fā)酵產(chǎn)物干重和 MAO 的抑制活性49
• 4.3 討論49-51
• 第5章 結(jié)論51-52
• 參考文獻52-59
• 作者簡介及在學期間所取得的科研成果59-60
• 致謝60

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李海燕;黃容;卿晨;沙濤;李凌飛;趙之偉;;法夏內(nèi)生菌株D126產(chǎn)細胞毒活性物質(zhì)布雷菲德菌素A的研究(英文)[J];天然產(chǎn)物研究與開發(fā);2008年01期

本文編號：754165