發(fā)布時(shí)間：2017-08-29 16:40

  本文關(guān)鍵詞：HPV16L1食管癌疫苗免疫效果的研究

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【摘要】：全世界每年約有30萬(wàn)人死于食管癌。我國(guó)食管癌發(fā)病率居世界第位，平均每年死亡15萬(wàn)人左右。調(diào)查資料顯示，食管癌是多種因素長(zhǎng)期協(xié)同作用所致的疾病，具體因素包括化學(xué)因素、環(huán)境因素、生物因素以及不良生活習(xí)慣等。越來(lái)越多的證據(jù)表明，人乳頭瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)與食管癌的發(fā)生密切相關(guān)，是其重要的病毒學(xué)病因。因此，，抗HPV的疫苗也能發(fā)揮防治食管癌的作用。 HPV疫苗分為預(yù)防性和治療性疫苗兩種。預(yù)防性疫苗誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體，對(duì)相應(yīng)型別的高危類型的HPV預(yù)防率100%，但是針對(duì)其他型別HPV無(wú)預(yù)防作用，也不能消除體內(nèi)已感染的HPV的細(xì)胞，無(wú)治療功能。治療性疫苗則通過(guò)激活細(xì)胞免疫來(lái)特異性地清除被病毒感染的細(xì)胞及相應(yīng)的癌細(xì)胞，達(dá)到治療疾病的目的。目前，治療性疫苗多集中于針對(duì)E6/E7為靶抗原，但是E6/E7為癌基因。雖可通過(guò)改造去除轉(zhuǎn)化活性，但安全性仍存在隱患，且改造后的E6/E7免疫原性明顯低于野生型。本課題組的前期研究發(fā)現(xiàn)，在食管癌組織及分離的細(xì)胞株中檢測(cè)到L1蛋白的表達(dá)，這為以L1蛋白為靶抗原的治療性疫苗的開發(fā)提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，且L1為結(jié)構(gòu)蛋白，安全性好是理想的候選疫苗的靶蛋白。 本課題組構(gòu)建了含有HPV16L1基因的重組DNA、重組腺病毒和重組腺相關(guān)病毒疫苗，并用制備的疫苗序貫重復(fù)免疫小鼠，分別通過(guò)假病毒中和滴定和酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法檢測(cè)疫苗特異性體液及細(xì)胞免疫應(yīng)答。結(jié)果顯示，用活體基因?qū)雰x免疫重組DNA疫苗與普通注射相比細(xì)胞免疫增強(qiáng)5倍。重組腺相關(guān)病毒、重組腺病毒、重組DNA疫苗單獨(dú)免疫小鼠均可產(chǎn)生強(qiáng)烈的體液免疫和細(xì)胞免疫反應(yīng)，但持續(xù)時(shí)間較短，末次免疫后11周檢測(cè)不到特異性細(xì)胞和體液免疫反應(yīng)。DNA、重組腺相關(guān)病毒、重組腺病毒疫苗序貫重復(fù)免疫組可誘導(dǎo)更強(qiáng)而持久的特異性體液及細(xì)胞免疫應(yīng)答，雖然在加強(qiáng)免疫后反應(yīng)呈下降趨勢(shì)，但在免疫后期，其下降速率明顯變慢，免疫反應(yīng)保護(hù)效力可維持更長(zhǎng)的時(shí)間，顯示了序貫重復(fù)免疫反應(yīng)策略的有效性。
【關(guān)鍵詞】：人乳頭瘤病毒 食管癌 疫苗 細(xì)胞免疫
【學(xué)位授予單位】：北京工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R392;R735.1
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 主要英文縮寫詞7-11
• 第1章 緒論11-19
• 1.1 HPV 及其研究現(xiàn)狀11-15
• 1.1.1 HPV 與相關(guān)疾病11-12
• 1.1.2 HPV 疫苗研究進(jìn)展12-14
• 1.1.3 方向和展望14-15
• 1.2 酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)反應(yīng)15-17
• 1.3 序貫重復(fù)免疫17
• 1.4 本課題研究?jī)?nèi)容17-18
• 1.5 技術(shù)路線18-19
• 第2章 HPV16 L1 腺相關(guān)病毒和 DNA 疫苗的擴(kuò)增純化19-31
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料19-20
• 2.1.1 質(zhì)粒、細(xì)胞和菌株19
• 2.1.2 工具酶及主要試劑19
• 2.1.3 主要儀器設(shè)備19-20
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法20-26
• 2.2.1 重組 DNA 疫苗的擴(kuò)增和純化20-21
• 2.2.2 pAAV-16L1 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化、提取和鑒定21-23
• 2.2.3 重組腺相關(guān)病毒包裝和純化23-26
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果和討論26-29
• 2.3.1 pAAV-16L1 重組質(zhì)粒酶切鑒定和測(cè)序結(jié)果26-27
• 2.3.2 pAAV-16L1 重組質(zhì)粒表達(dá)蛋白鑒定27-28
• 2.3.3 純化的 rAAV2/1-mod.HPV16L1 衣殼蛋白鑒定28
• 2.3.4 純化的 rAAV2/1-mod.HPV16L1 電鏡觀察28-29
• 2.3.5 純化的 rAAV2/1-mod.HPV16L1 滴度測(cè)定29
• 2.4 本章小結(jié)29-31
• 第3章 重組疫苗免疫效果的研究31-55
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料31-32
• 3.1.1 細(xì)胞和疫苗31
• 3.1.2 要試劑31
• 3.1.3 主要儀器設(shè)備31-32
• 3.1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物32
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法32-38
• 3.2.1 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)32-34
• 3.2.2 多載體疫苗免疫反應(yīng)的檢測(cè)34-38
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果和討論38-54
• 3.3.1 T 細(xì)胞表位肽38-39
• 3.3.2 活體基因?qū)雰x與普通注射免疫效果比較39-41
• 3.3.3 不同劑量重組腺病毒疫苗細(xì)胞免疫效果的比較41
• 3.3.4 HPV16L1 單種疫苗接種誘導(dǎo)的細(xì)胞免疫反應(yīng)41-43
• 3.3.5 HPV16L1 多載體疫苗接種誘導(dǎo)的細(xì)胞免疫反應(yīng)43-46
• 3.3.6 HPV16L1 特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)的動(dòng)態(tài)變化趨勢(shì)46-48
• 3.3.7 HPV16L1 單種疫苗接種誘導(dǎo)的體液免疫反應(yīng)48-50
• 3.3.8 HPV16L1 多載體疫苗接種誘導(dǎo)的體液免疫反應(yīng)50-52
• 3.3.9 HPV16L1 特異性體液免疫反應(yīng)的動(dòng)態(tài)變化趨勢(shì)52-54
• 3.4 本章小結(jié)54-55
• 結(jié)論55-57
• 參考文獻(xiàn)57-61
• 攻讀碩士學(xué)位期間的主要成果61-63
• 致謝63

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 田厚文,韓立群,任皎,駱衛(wèi)峰,陸振華,阮力;HPV16型E7復(fù)制型DNA疫苗誘發(fā)的抗腫瘤免疫反應(yīng)[J];病毒學(xué)報(bào);2003年01期

2 焦慶f ;易發(fā)平;汪長(zhǎng)東;袁成福;劉勒;蘭歡;符少月;艾青;宋方洲;;HPV 16 E6E7基因修飾樹突狀細(xì)胞疫苗誘導(dǎo)CTL致CaSki細(xì)胞凋亡體外實(shí)驗(yàn)研究[J];中國(guó)免疫學(xué)雜志;2011年02期

本文編號(hào)：754379