本文關(guān)鍵詞：WISP1與TLRs激動劑在巨噬細(xì)胞中協(xié)同促炎機(jī)制的研究

  更多相關(guān)文章： WISP1 LPS Poly I:C 整合素 Toll樣受體 巨噬細(xì)胞

【摘要】：背景： WISP1（CCN4）是Wnt/β-catenin信號通路激活后誘發(fā)轉(zhuǎn)錄的基因之一，其編碼的蛋白屬于CCN蛋白家族，具有多種調(diào)控功能，是連接細(xì)胞外基質(zhì)及細(xì)胞信號傳導(dǎo)的重要因子。CCN蛋白通過結(jié)合整合素受體激活信號通路，而整合素信號通路的激活在急性肺損傷中發(fā)揮重要作用。近來研究發(fā)現(xiàn)WISP1是機(jī)械通氣誘導(dǎo)肺損傷的易感基因，而巨噬細(xì)胞在肺的炎癥反應(yīng)中具有重要作用。 目的： 本研究擬在巨噬細(xì)胞模型中探討WISP1單獨或與TLRs激動劑共同刺激對巨噬細(xì)胞炎癥因子分泌的影響，以揭示W(wǎng)ISP1在炎癥發(fā)生中的作用機(jī)制，為WISP1介入治療急性肺損傷提供新的理論基礎(chǔ)。 方法： 首先在細(xì)胞水平，觀察WISP1在炎癥反應(yīng)中的作用，通過ELISA檢測細(xì)胞培養(yǎng)基中促炎因子TNF-α的水平，比較直接給予WISP1刺激或RGDs預(yù)處理阻斷整合素通路后WISP1刺激對巨噬細(xì)胞分泌炎性因子的影響，，并通過免疫印跡檢測下游信號因子p38MAPK、NF-κB的磷酸化水平，在分子水平探討細(xì)胞內(nèi)的信號傳導(dǎo)機(jī)制。其次通過分離脂筏或免疫熒光的方法檢測WISP1單獨或與LPS共同刺激對TLR4受體復(fù)合物向脂筏募集過程的影響。再次，觀察TLRs激動劑刺激對巨噬細(xì)胞中整合素表達(dá)水平影響，并通過TLR相關(guān)通路基因敲除小鼠（TLR4、CD14、TRIF）驗證TLR通路的完整性對整合素表達(dá)的重要性。最后，觀察WISP1與TLRs激動劑共同刺激巨噬細(xì)胞后，巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)性的變化，明確WISP1-整合素信號通路與TLR通路間的相互影響在炎癥反應(yīng)中的作用。 結(jié)果： 1).WISP1單獨刺激RAW264.7細(xì)胞后， p38MAPK，NF-κB（P65）的磷酸化水平增加，促炎因子TNF-α的分泌增加（P0.01）。RGDS預(yù)處理阻斷整合素結(jié)合后，抑制TNF-α的分泌（P0.05）。表明整合素受體介導(dǎo)了WISP1的促炎作用。 2).WISP1增加MD2、整合素β3在脂筏分布。TLRs激動劑刺激原代腹腔巨噬細(xì)胞后，AKT、p38MAPK、NF-κB通路磷酸化水平增加,整合素β1，整合素β3的表達(dá)水平上調(diào)（P0.01），敲除TLR相關(guān)通路基因（TLR4、CD14、TRIF）后TLRs激動劑上調(diào)整合素表達(dá)的作用降低甚至消失。此結(jié)果表明TLRs炎性信號通路的激活可上調(diào)WISP1整合素受體的表達(dá)。 3).WISP1與TLRs激動劑共同刺激細(xì)胞后，TNF-α的水平較二者單獨刺激明顯增加（P0.05），RGDS預(yù)處理后，二者共同作用與單獨刺激無明顯差異。進(jìn)一步證明整合素受體介導(dǎo)了WISP1與TLRs激動劑之間的協(xié)同促炎作用。 結(jié)論： WISP1通過與巨噬細(xì)胞表面整合素受體作用而激活p38MAPK及NF-κB炎性信號通路。WISP1通過整合素受體上調(diào)TLRs受體復(fù)合物的形成，從而增強(qiáng)TLRs激動劑增強(qiáng)炎癥反應(yīng)強(qiáng)度。而TLRs信號通路的激活反過來又增強(qiáng)整合素的表達(dá)，因此正反饋上調(diào)WISP1的促炎功能。這種正反饋弧的形成是WISP1在巨噬細(xì)胞中與TLRs激動劑協(xié)同促炎的機(jī)理。
【關(guān)鍵詞】：WISP1 LPS Poly I:C 整合素 Toll樣受體 巨噬細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R363
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-7
• 目錄7-10
• 第1章 引言10-13
• 第2章 材料與方法13-24
• 2.1 材料13-16
• 2.1.1 研究對象13
• 2.1.2 主要試劑與耗材13-15
• 2.1.3 主要儀器15-16
• 2.2 實驗方法16-24
• 2.2.1 RAW264.7 細(xì)胞培養(yǎng)16-17
• 2.2.2 分離小鼠原代腹腔巨噬細(xì)胞17
• 2.2.3 Western Blot 實驗17-21
• 2.2.4 TNF-αELISA 檢測21-22
• 2.2.5 免疫熒光22
• 2.2.6 分離脂筏22-24
• 第3章 結(jié)果24-39
• 3.1 WISP1 與 TLRs 受體激動劑在 RAW264.7 巨噬細(xì)胞中的功能與機(jī)制研究24-29
• 3.1.1 WISP1 促進(jìn) RAW264.7 細(xì)胞分泌促炎細(xì)胞因子 TNF-α，RGDS 預(yù)處理阻斷整合素通路后抑制 WISP1 促炎作用24-25
• 3.1.2 WISP1 激活 p38MAPK/NF-κB 通路25-26
• 3.1.3 WISP1 與 TLRs 激動劑 LPS 或 Poly I:c 共同作用具有協(xié)同增強(qiáng)細(xì)胞分泌促炎因子功能26-27
• 3.1.4 WISP1 增加 TLR4 受體復(fù)合物向脂筏的募集27-29
• 3.2 WISP1 與 TLRs 受體激動劑在小鼠原代腹腔巨噬細(xì)胞中的功能及機(jī)制研究29-39
• 3.2.1 WISP1 與 TLRs 激動劑 LPS 或 PolyI:c 共同刺激腹腔巨噬細(xì)胞后協(xié)同性增強(qiáng)細(xì)胞分泌促炎因子 TNF-α，RGDS 預(yù)處理阻斷整合素通路后，協(xié)同作用消失29-31
• 3.2.2 TLR 相關(guān)基因（TLR4，CD14，TRIF）敲除后，WISP1 與 TLRs激動劑的協(xié)同作用明顯減弱甚至消失31-32
• 3.2.3 WISP1 可低水平激活 p38MAPK/NF-κB 通路，但對細(xì)胞因子 TNF-α的分泌無明顯影響32-33
• 3.2.4 原代腹腔巨噬細(xì)胞整合素β1 及β3 的水平明顯低于 RAW264.7 細(xì)胞2433-34
• 3.2.5 TLRs 激動劑 LPS 或 PolyI:c 刺激腹腔巨噬細(xì)胞后，激活p38MAPK/NF-κB 通路后，上調(diào)整合素β1，β3 的表達(dá)34-36
• 3.2.6 TLR 相關(guān)基因（TLR4，CD14，TRIF）敲除后，TLRs 激動劑 LPS或 Poly I:C 刺激原代腹腔巨噬細(xì)胞后，整合素的表達(dá)水平增加幅度減低甚至消失36-37
• 3.2.7 TLRs 激動劑通過激活 p38MAPK/NF-kB-P65 通路上調(diào)整合素的表達(dá)并依賴于 TLR 通路的完整性37-39
• 第4章 討論39-42
• 第5章 結(jié)論42-43
• 致謝43-44
• 參考文獻(xiàn)44-46
• 個人簡歷 在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果46-47
• 綜述47-56
• 參考文獻(xiàn)53-56

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9 王海坤;韓代書;;Toll樣受體(TLRs)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與免疫調(diào)節(jié)[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2006年09期

10 楊翠蘭;富寧;;TLRs在過敏性炎癥反應(yīng)中的作用[J];國際免疫學(xué)雜志;2006年05期

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1 耿建林;田志剛;;TLRs與其配體相互作用對肝臟淋巴細(xì)胞亞群的影響[A];中國免疫學(xué)會第五屆全國代表大會暨學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2006年

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4 王華民;李一;;TLRs與真菌感染的關(guān)系[A];第六屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會論文集[C];2008年

5 謝世良;;C-type Lectins and TLRs are Critical for Candida albicans-induced Neutrophil Activation[A];免疫細(xì)胞生物學(xué)熱點研究進(jìn)展——海峽兩岸免疫細(xì)胞生物學(xué)研討會論文摘要集[C];2013年

6 Vincent Deubel;Mustapha Si-Tahar;Lena Alexopoulou;Richard Flavell;;Toll-like receptors (TLRs) signaling suppresses the apoptosis of virus-infected cells[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會暨中國免疫學(xué)會獸醫(yī)免疫分會第八次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

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1 應(yīng)慶;天然免疫中TLRs調(diào)節(jié)機(jī)制[N];中國醫(yī)藥報;2005年

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1 茍鐘勇;雞TLRs基因的表達(dá)調(diào)控與抗沙門氏菌的機(jī)制研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2012年

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7 陳志霞;WISP1與TLRs激動劑在巨噬細(xì)胞中協(xié)同促炎機(jī)制的研究[D];南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院;2013年

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