發(fā)布時(shí)間：2017-08-22 17:14

  本文關(guān)鍵詞：缺氧誘導(dǎo)因子-1α介導(dǎo)的熱休克蛋白70在熱耐受對(duì)抗高溫誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡中的作用

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【摘要】：目的： 觀(guān)察在非致死性高溫誘導(dǎo)的熱耐受過(guò)程中HIF-1α對(duì)HSP70的表達(dá)的影響及其在熱耐受保護(hù)中的作用。闡明熱耐受過(guò)程中HSP70的表達(dá)是否具有HIF-1ɑ依賴(lài)性，HIF-1ɑ介導(dǎo)的HSP70是否通過(guò)其抗細(xì)胞凋亡作用參與心肌細(xì)胞熱耐受保護(hù)。 方法： （1）將H9c2心肌細(xì)胞隨機(jī)分為12組，每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次：常溫對(duì)照組（Control組）、熱耐受組（T組）、熱耐受/高溫組（T/H組）、高溫組（H組）、DMSO+常溫對(duì)照組（DMSO組）、YC-1干預(yù)+熱耐受組（YC-1+T組）、YC-1干預(yù)+熱耐受/高溫（YC-1+T/H組）、YC-1干預(yù)+高溫組（YC-1+H組）、Lipo+常溫對(duì)照組（Lipo組）、RNAi干擾+熱耐受組（RNAi+T組）、RNAi干擾+熱耐受/高溫（RNAi+T/H組）、RNAi干擾+高溫組（RNAi+H組）。（2）培養(yǎng)H9c2心肌細(xì)胞，建立熱耐受(40℃，3h）及熱應(yīng)激（43℃，2h）模型。（3）使用HIF-1α的特異性抑制劑YC-1（終濃度100μM/L），在轉(zhuǎn)錄后水平抑制HIF-1α的表達(dá)后進(jìn)行熱耐受或高溫處理。（4）使用Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染HSP70-siRNA于H9c2心肌細(xì)胞后進(jìn)行熱耐受或高溫處理。（5）采用AnnexinV-FITC雙染流式細(xì)胞法檢測(cè)各組細(xì)胞的凋亡率；Western blot檢測(cè)細(xì)胞HIF-1ɑ、HSP70及caspase-3蛋白表達(dá)情況。 結(jié)果： （1）熱耐受/高溫組的細(xì)胞凋亡率顯著低于高溫組（p0.01）。抑制HIF-1ɑ表達(dá)后的熱耐受/高溫組和高溫組的凋亡率均顯著高于未經(jīng)YC-1處理的相應(yīng)組（p0.01），并且抑制HIF-1ɑ表達(dá)后，，熱耐受/高溫組與高溫組的凋亡率沒(méi)有顯著差別。（2）與常溫對(duì)照組相比，熱耐受能顯著提高HIF-1ɑ和HSP70的表達(dá)水平（p0.05）；熱耐受/高溫組的HIF-1ɑ和HSP70表達(dá)水平均明顯高于高溫組（p0.01）。與對(duì)照組相比，YC-1能夠明顯抑制熱耐受組、熱耐受/高溫組及高溫組的HIF-1ɑ（p0.01）。抑制HIF-1ɑ表達(dá)后的熱耐受組、熱耐受/高溫組及高溫組，其HSP70的表達(dá)也顯著低于對(duì)照組（p0.01）。使用HSP70-siRNA抑制HSP70的表達(dá)后，熱耐受/高溫組HIF-1ɑ的表達(dá)量仍顯著高于高溫組（p0.01）。（3）熱耐受/高溫組的caspase-3表達(dá)水平顯著低于高溫組（p0.01）。抑制HIF-1ɑ表達(dá)后，熱耐受/高溫組及高溫組caspase-3的表達(dá)水平均明顯增加（p0.01），并且抑制HIF-1ɑ表達(dá)后，熱耐受/高溫組與高溫組caspase-3的表達(dá)水平?jīng)]有顯著差別。 結(jié)論： （1）HIF-1ɑ在熱耐受對(duì)抗高溫誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡過(guò)程中發(fā)揮保護(hù)作用；（2）熱耐受及熱應(yīng)激時(shí)HSP70的表達(dá)具有HIF-1ɑ依賴(lài)性；（3）HIF-1ɑ介導(dǎo)的HSP70通過(guò)其抗細(xì)胞凋亡作用參與心肌細(xì)胞熱耐受保護(hù)。
【關(guān)鍵詞】：缺氧誘導(dǎo)因子-1ɑ 熱休克蛋白70 熱耐受 熱應(yīng)激 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R363
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文縮略詞表9-10
• 第1章 引言10-13
• 第2章 材料與方法13-25
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料13-16
• 2.1.1 細(xì)胞來(lái)源13
• 2.1.2 主要購(gòu)置試劑13-14
• 2.1.3 主要自配試劑14-15
• 2.1.4 主要儀器設(shè)備15-16
• 2.2 方法16-25
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)16-17
• 2.2.2 建立熱耐受及熱應(yīng)激模型17-18
• 2.2.3 YC-1 干預(yù)18
• 2.2.4 HSP70-siRNA 干預(yù)18
• 2.2.5 實(shí)驗(yàn)分組18-20
• 2.2.6 AnnexinV-FITC 雙染流式細(xì)胞法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率20-21
• 2.2.7 Western blot 檢測(cè) H9c2 心肌細(xì)胞中 HIF-1ɑ、HSP70 和 Caspase 3 蛋白的表達(dá)21-23
• 2.2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析23-25
• 第3章 結(jié)果25-31
• 3.1 HIF-1ɑ在熱耐受對(duì)抗高溫誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡中的作用25-26
• 3.2 熱耐受對(duì)抗高溫誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡時(shí)各組細(xì)胞 HIF-1ɑ和 HSP70 蛋白的表達(dá)26-27
• 3.3 YC-1 干預(yù)后各組細(xì)胞 HIF-1ɑ和 HSP70 蛋白的表達(dá)27-28
• 3.4 YC-1 干預(yù)前、后各組細(xì)胞 Caspase 3 蛋白的表達(dá)28-29
• 3.5 HSP70-siRNA 干擾后各組細(xì)胞 HIF-1ɑ和 HSP70 蛋白的表達(dá)29-31
• 第4章 討論31-34
• 第5章 結(jié)論34-35
• 致謝35-36
• 參考文獻(xiàn)36-38
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果38-39
• 綜述39-43
• 參考文獻(xiàn)42-43

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