本文關(guān)鍵詞：人源化肝臟嵌合體小鼠模型的建立及MSC介導(dǎo)的免疫抑制作用在肝細(xì)胞移植中的應(yīng)用

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【摘要】：應(yīng)用人肝細(xì)胞異種移植到受體鼠肝內(nèi)建立人源化肝臟的嵌合體小鼠（人鼠嵌合肝），對(duì)藥物代謝、乙肝病毒等嗜肝性病毒及其疫苗的研究具有重要的意義。延胡索酰乙酰乙酸水解酶基因剔除小鼠（Fah~(-/-)小鼠），是模擬遺傳型酪氨酸血癥I型疾病建立的小鼠模型。作為國(guó)際上公認(rèn)度很高的肝損傷模型之一，F(xiàn)ah~(-/-)小鼠已被廣泛應(yīng)用于肝臟再殖的研究。Fah~(-/-)小鼠是開(kāi)展肝細(xì)胞移植的理想模型，100個(gè)移植的肝細(xì)胞就可重建肝小葉的結(jié)構(gòu)與功能。非肥胖糖尿病/嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷（NOD/SCID）小鼠具有T、B淋巴細(xì)胞聯(lián)合免疫缺陷、NK細(xì)胞活性低下、無(wú)循環(huán)補(bǔ)體、無(wú)巨噬細(xì)胞和抗原提呈細(xì)胞功能損害等多種先天和獲得性免疫缺陷，不易發(fā)生免疫逃逸，是理想的異種移植模型。本研究結(jié)合Fah~(-/-)小鼠的肝臟再殖優(yōu)勢(shì)與Nod/Scid小鼠可以異種移植的特點(diǎn)，將兩個(gè)品系雜交繁育建立Fah~(-/-)Nod/Scid小鼠品系,開(kāi)展人肝細(xì)胞移植到Fah~(-/-)Nod/Scid小鼠建立人源化肝臟嵌合體小鼠模型的研究。通過(guò)對(duì)人的肝細(xì)胞在Fah~(-/-)Nod/Scid小鼠肝臟中再殖及其程度觀察，評(píng)價(jià)再殖的人肝細(xì)胞能否具有正常的肝細(xì)胞功能，評(píng)價(jià)利用人肝細(xì)胞移植Fah~(-/-)Nod/Scid小鼠建立人鼠嵌合肝模型的可行性。 同時(shí)，在臨床上開(kāi)展肝細(xì)胞移植治療肝臟疾病的實(shí)踐中，應(yīng)用同種異基因人肝細(xì)胞移植時(shí)可能導(dǎo)致的免疫反應(yīng)是不得不考慮的問(wèn)題。間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）能與先天或獲得性免疫系統(tǒng)的細(xì)胞相互作用，通過(guò)調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的效應(yīng)分子發(fā)揮免疫抑制和組織修復(fù)的作用，為其在臨床上應(yīng)用以調(diào)節(jié)肝細(xì)胞移植時(shí)的免疫反應(yīng)提供了可能的選擇方案。因此，在第二部分研究中，我們以同種異基因小鼠肝細(xì)胞與MSCs混合移植Fah~(-/-)小鼠模型，以移植細(xì)胞是否再殖受體小鼠肝臟作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，觀察間充質(zhì)干細(xì)胞在肝細(xì)胞移植中是否發(fā)揮免疫抑制作用，以及這種作用是否能促進(jìn)同種異基因小鼠肝細(xì)胞在受體肝臟中的再殖。 在第一部分研究中，首先，通過(guò)雜交、基因型鑒定和保種繁育，我們建立了Fah~(-/-)Nod/Scid小鼠品系，該小鼠品系可以純合保種并且能夠正常繁殖；其次，我們開(kāi)展了同種異基因小鼠肝細(xì)胞移植Fah~(-/-)Nod/Scid小鼠的工作。通過(guò)觀察小鼠肝細(xì)胞在Fah~(-/-)Nod/Scid小鼠肝臟中的再殖及其程度，評(píng)價(jià)建立的Fah~(-/-)Nod/Scid小鼠是否具備免疫缺陷Fah~(-/-)小鼠的基本生物學(xué)特性，，為下一步進(jìn)行人肝細(xì)胞移植建立人鼠嵌合肝模型奠定基礎(chǔ)；第三，分離原代人肝細(xì)胞并移植Fah~(-/-)Nod/Scid小鼠。在人肝細(xì)胞移植前后，我們針對(duì)受體鼠采取了一些預(yù)處理措施，包括：移植前一周逐步撤除Fah~(-/-)抑制藥物NTBC，提前誘導(dǎo)受體小鼠肝臟的損傷來(lái)形成有利外源細(xì)胞植入的微環(huán)境；細(xì)胞移植后用臨床常用的免疫抑制劑——FK506抑制異種細(xì)胞移植后的免疫排斥反應(yīng)，促進(jìn)植入人肝細(xì)胞的增殖。通過(guò)以上處理措施，觀察人肝細(xì)胞在Fah~(-/-)Nod/Scid小鼠肝臟中再殖及再殖的肝細(xì)胞是否有正常的肝細(xì)胞功能。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果表明，移植的人肝細(xì)胞能夠在Fah~(-/-)Nod/Scid小鼠肝臟中顯著增殖，肝臟再殖程度可達(dá)30%以上。采用體重曲線(xiàn)、肝功能生化和人肝細(xì)胞功能蛋白表達(dá)等三方面指標(biāo)評(píng)價(jià)嵌合肝臟中人肝細(xì)胞的功能，結(jié)果表明再殖的肝細(xì)胞具有正常人肝細(xì)胞的功能。以上結(jié)果表明，F(xiàn)ah~(-/-)Nod/Scid小鼠可以作為理想的可規(guī)�；瘧�(yīng)用的人鼠嵌合肝模型，該技術(shù)體系的改進(jìn)簡(jiǎn)化了Fah~(-/-)小鼠作為人源化肝臟小鼠模型的實(shí)用性問(wèn)題。 在第二部分研究中，應(yīng)用提前撤除受體小鼠抑制藥物NTBC的預(yù)處理方案，我們分別將未處理及以細(xì)胞因子IFN-γ和TNF-α活化處理的MSCs混合C57BL/6J品系小鼠肝細(xì)胞移植129S4品系的Fah~(-/-)小鼠，同時(shí)選擇在混合移植前1天及移植后1、3、5、7天分別對(duì)受體尾靜脈注射MSCs以增強(qiáng)其免疫抑制作用。采用免疫組織化學(xué)、體重曲線(xiàn)以及肝臟生化指標(biāo)，觀察不同處理的MSCs在同種異基因小鼠肝細(xì)胞移植中的免疫抑制作用。結(jié)果表明，C57BL/6J肝細(xì)胞單獨(dú)移植129S4Fah~(-/-)小鼠時(shí)，未見(jiàn)任何移植細(xì)胞的植入和增殖；C57BL/6J肝細(xì)胞混合未經(jīng)細(xì)胞因子誘導(dǎo)處理MSCs移植時(shí)，129S4Fah~(-/-)小鼠肝臟中出現(xiàn)單個(gè)散在的移植細(xì)胞植入；C57BL/6J肝細(xì)胞混合經(jīng)細(xì)胞因子IFN-γ和TNF-α活化處理MSCs移植時(shí)，移植細(xì)胞在受體肝臟中的再殖程度提高，損傷的肝臟功能明顯改善。這些結(jié)果初步表明MSCs在同種異基因小鼠肝細(xì)胞移植中發(fā)揮了一定的免疫抑制作用，并改善了受體小鼠的肝臟功能，為進(jìn)一步開(kāi)展應(yīng)用MSCs調(diào)節(jié)臨床上肝細(xì)胞移植后的免疫抑制作用奠定了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：FAH基因剔除小鼠 人源化肝臟 肝細(xì)胞移植 免疫抑制 間充質(zhì)干細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R-332;R392
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 縮略詞表9-10
• 前言10-13
• 第一部分 人源化肝臟嵌合體小鼠模型的建立13-35
• 實(shí)驗(yàn)材料13-17
• 實(shí)驗(yàn)方法17-25
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-32
• 討論32-35
• 第二部分 MSC 介導(dǎo)的免疫抑制作用在肝細(xì)胞移植中的應(yīng)用35-52
• 實(shí)驗(yàn)材料35-39
• 實(shí)驗(yàn)方法39-43
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果43-50
• 討論50-52
• 綜述52-60
• 參考文獻(xiàn)60-68
• 碩士在讀期間發(fā)表論文及獲獎(jiǎng)情況68-69
• 致謝69

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 蘇寶亮;劉長(zhǎng)城;向?qū)?張海斌;袁斯明;王敏君;陳費(fèi);朱海英;何志穎;王欣;胡以平;;人成體肝細(xì)胞在Fah~(-/-)Nod/Scid小鼠肝臟中的顯著增殖[J];中國(guó)科學(xué):生命科學(xué);2010年10期

本文編號(hào)：720383