本文關(guān)鍵詞：雙熒光mRFP-eGFP-LC3體系在細胞自噬中的作用

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【摘要】：目的:探討雙熒光mRFP-e GFP-LC3(ptf LC3)體系在細胞自噬中的作用。方法:采用不同濃度雷帕霉素(50、100、200、500、1 000 nmol/L)處理人胚腎細胞(HEK293),蛋白印跡法檢測不同濃度雷帕霉素組中自噬標記蛋白(LC3蛋白)的表達及LC3-II/LC3-I比值;單熒光GFP-LC3質(zhì)粒和雙熒光mRFP-e GFP-LC3質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HEK293細胞,雷帕霉素(200 nmol/L)處理3 h,采用熒光顯微鏡統(tǒng)計,并比較兩種方法轉(zhuǎn)染后HEK293細胞內(nèi)LC3亮點的變化。結(jié)果:不同濃度雷帕霉素處理HEK293細胞,LC3-II蛋白和LC3-II/LC3-I比值均增加;轉(zhuǎn)染GFP-LC3質(zhì)粒時,雷帕霉素處理HEK293細胞中綠色亮點的數(shù)量增加;轉(zhuǎn)染mRFP-e GFP-LC3質(zhì)粒時,雷帕霉素處理HEK293細胞中綠色和紅色亮點數(shù)量均增加。結(jié)論:雙熒光mRFP-e GFP-LC3體系優(yōu)于單熒光GFP-LC3體系,更能全面完整地反映細胞自噬水平,能夠反映細胞內(nèi)自噬流的變化,是自噬定量分析的可靠方法。
【作者單位】： 廣州心血管疾病研究所廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院心內(nèi)科;
【關(guān)鍵詞】： 雷帕霉素 自噬 人胚腎細胞 LC 單熒光GFP-LC質(zhì)粒 雙熒光mRFP-e GFP-LC
【基金】：國家自然科學(xué)基金青年項目(81300151)
【分類號】：R363
【正文快照】： 自噬(autophagy)即自體吞噬,與異體吞噬相對,是細胞內(nèi)形成的雙層膜結(jié)構(gòu)包繞自己內(nèi)部受損傷的蛋白質(zhì)或細胞器,比如線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)或高爾基體碎片等,進而與溶酶體融合將其內(nèi)容物降解的過程。越來越多的研究發(fā)現(xiàn),自噬與惡性腫瘤、心臟疾病、神經(jīng)退行性疾病等密切相關(guān)[1-2],這使得

【共引文獻】

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本文編號：713953