本文關(guān)鍵詞：旋毛蟲膜蛋白新基因Tmp10的免疫篩選及鑒定

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【摘要】：目的免疫篩選旋毛蟲成蟲c DNA文庫,尋找抗旋毛蟲病的疫苗候選抗原或診斷抗原。方法應(yīng)用旋毛蟲感染的豬血清免疫篩選旋毛蟲成蟲c DNA文庫,獲得陽性克隆。將一陽性克隆與原核表達(dá)載體p ET-28a(+)構(gòu)建重組質(zhì)粒,異丙醇硫代-β-D-半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactoside,IPTG)誘導(dǎo)后,利用親和層析柱純化目的蛋白,并通過酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和Western blotting鑒定其抗原特異性和免疫原性。結(jié)果免疫篩選旋毛蟲成蟲c DNA文庫獲得42個(gè)陽性克隆,選取一個(gè)新基因Tmp10,成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒p ET-28a(+)/Tmp10,誘導(dǎo)表達(dá)后獲得的重組蛋白(r Tmp10)的相對(duì)分子質(zhì)量約為40 000。Western blotting檢測(cè)結(jié)果顯示,該重組蛋白可被旋毛蟲感染小鼠和豬血清所識(shí)別,具有抗原特異性。r Tmp10免疫小鼠可誘導(dǎo)產(chǎn)生高滴度的抗體,顯示其具有較好的免疫原性。結(jié)論免疫篩選旋毛蟲成蟲c DNA文庫獲得一個(gè)新基因Tmp10,生物信息學(xué)分析預(yù)測(cè)其為膜蛋白,其重組蛋白(r Tmp10)具有較好的抗原特異性和免疫原性。
【作者單位】： 首都醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)系;
【關(guān)鍵詞】： 旋毛蟲 cDNA文庫 膜蛋白 表達(dá)
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81371837) 國家傳染病科技重大專項(xiàng)(2012ZX10004220-012) 北京市自然科學(xué)基金(5122007)~~
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 旋毛蟲病是一種嚴(yán)重的人獸共患寄生蟲病,其臨床表現(xiàn)較為復(fù)雜,目前理想的無創(chuàng)性的檢驗(yàn)及診斷方法仍未找到[1-2],且尚無有效抗病疫苗問世。因此,尋找特異有效的旋毛蟲抗原一直是研究的熱點(diǎn)。通過構(gòu)建c DNA文庫,通過適宜的方法從文庫中釣取c D-NA,是尋找新的特異性抗原基因的較好

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1 蔡更元;陳瑤生;王，

本文編號(hào)：713942