本文關(guān)鍵詞：粉塵螨第24組過敏原cDNA克隆表達及其免疫學(xué)特性的研究

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【摘要】：目的克隆表達粉塵螨第24組過敏原cDNA,研究其免疫學(xué)特性,為深入研究塵螨致敏機制提供基礎(chǔ)。方法以粉塵螨cDNA文庫為模板,根據(jù)Der f24基因序列(GenBank Accession No.KC669700)設(shè)計引物,PCR擴增Der f24cDNA,構(gòu)建原核表達載體pET-His-Derf24,并經(jīng)酶切鑒定和DNA測序,轉(zhuǎn)化至E.coli BL21(DE3)plysS,用異丙基-β-D-硫代半乳糖(IPTG)誘導(dǎo)表達;重組產(chǎn)物經(jīng)Ni 2+螯合層析純化,獲得重組的Der f24(14kDa);對重組蛋白進行IgE-Western blotting(WB)實驗和IgE-ELISA實驗;通過Swiss-model軟件模擬Der f24的3D結(jié)構(gòu)并通過DNAStar軟件分析其潛在的B細胞表位,合成三個肽(位置分別為75-88aa、44-57aa和104-117aa)進行IgE-ELISA實驗。結(jié)果克隆的Der f24基因cDNA序列全長為357bp,編碼118個氨基酸(GenBank Accession No.KP064571);Der f24原核表達主要形式為不可溶的包涵體,純化后的重組Der f24蛋白分子量約為14kDa。IgE-WB結(jié)果顯示,重組Der f24與10例粉塵螨過敏患者血清呈強陽性反應(yīng),而與10例健康對照組均為陰性。IgE-ELISA結(jié)果顯示,合成表位肽(No.1 75-88aa:Z=5.6734、No.2 44-57aa:Z=5.6720和No.3 104-117aa:Z=5.6791;P0.0001)均與22例粉塵螨過敏患者血清呈陽性反應(yīng),而與22例健康對照組血清呈陰性反應(yīng)。結(jié)論本研究成功克隆表達了Der f24cDNA,重組Der f24可結(jié)合粉塵螨過敏血清IgE,鑒定了3個潛在的IgE B細胞表位。本研究為進一步防治螨性過敏性疾病奠定了技術(shù)基礎(chǔ)。
【作者單位】： 深圳大學(xué)醫(yī)學(xué)院過敏反應(yīng)與免疫學(xué)研究所;深圳市過敏反應(yīng)與免疫學(xué)重點實驗室;深圳大學(xué)第一附屬醫(yī)院;
【關(guān)鍵詞】： 粉塵螨 Der f cDNA克隆 過敏原性 B細胞表位
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No.31328014,No.31400786) 廣東省科技計劃(No.2013B03180002) 深圳市科技計劃(No.JCYJ20130326112225593)聯(lián)合資助~~
【分類號】：R392
【正文快照】： Fund:Supported by the National Natural Science Foundation of China((No.31328014and No.31400786),the Science andTechnology Foundation of Guangdong Province(No.2013B03180002)and the Science and Technology Foundation of ShenzhenCity(No.JCYJ20130326112225593

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 滕飛翔;俞黎黎;卞勇華;孫金霞;張承伯;王楠;楊李;崔玉寶;;塵螨變應(yīng)原Der f 6、Der p 6和Blo t 6結(jié)構(gòu)的比較研究[J];基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué);2014年04期

2 王曉春;石連;沈靜;李朝品;;淮南市不同生境中主要塵螨變應(yīng)原的基因檢測[J];環(huán)境與健康雜志;2010年12期

3 孫勁旅;陳軍;張宏譽;;塵螨過敏原的交叉反應(yīng)性[J];昆蟲學(xué)報;2006年04期

4 楊朝曄;周鷹;史衛(wèi)紅;俞敏;馬桂芳;丁鳳云;楊李;王運剛;崔玉寶;;粉塵螨變應(yīng)原第3組分全長基因克隆及其結(jié)構(gòu)功能分析[J];免疫學(xué)雜志;2010年03期

5 王曉春;李朝品;;粉螨變應(yīng)原制備的實驗研究進展[J];熱帶病與寄生蟲學(xué);2006年03期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 孫振燕;大連地區(qū)變應(yīng)性疾病過敏原分析[D];大連醫(yī)科大學(xué);2008年

2 黃建芳;河蝦主要過敏原單克隆抗體的制備及河蝦過敏原不同組分共同表位分析[D];暨南大學(xué);2010年

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王少圣;劉文艷;李朝品;陳文魁;;粉塵螨的培養(yǎng)實驗[J];醫(yī)學(xué)理論與實踐;2007年06期

2 陳子慶;粉塵螨制劑的制備[J];江蘇醫(yī)藥;1982年06期

3 蔡黎,項t，

本文編號：711613