本文關(guān)鍵詞：狂犬病毒口服活疫苗的研制

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【摘要】：人類與狂犬病的博弈已經(jīng)由來(lái)已久，但是時(shí)至今日，人或者動(dòng)物感染狂犬病毒后，如果未作任何醫(yī)學(xué)處理，發(fā)病后的死亡率醫(yī)學(xué)界公認(rèn)接近100%。從理論上來(lái)說(shuō)，現(xiàn)在公認(rèn)的結(jié)果是，幾乎所有的飛禽走獸都可以感染和傳播狂犬病。但是最主要的傳播者是犬、貓、鼠等。雖然狂犬病無(wú)法治愈，但是人們可以對(duì)其預(yù)防控制。 我國(guó)狂犬病疫情世界排名第二，僅次于印度，，最近幾年，隨著“寵物熱”的出現(xiàn)我國(guó)狂犬病的發(fā)病情況呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，目前我國(guó)防治狂犬病的主要措施有以下兩種方法:一種是捕殺法，易感動(dòng)物的多少直接影響著狂犬病毒疫情的控制。但是捕殺法是一種很殘酷的措施。只能在少數(shù)動(dòng)物中實(shí)施。另一種是疫苗免疫法，是我國(guó)防治狂犬病的主要措施，目前我國(guó)主要采用注射用疫苗，但是注射型疫苗無(wú)法對(duì)野生動(dòng)物大范圍接種,不能形成免疫圈。而且疫苗價(jià)格高，需經(jīng)過(guò)多次注射，注射過(guò)程冗繁。相較于注射用疫苗，口服疫苗可以在極大程度上克服以上缺點(diǎn)，口服疫苗方便、安全尤其適合散養(yǎng)犬及野生動(dòng)物的免疫，有利于建立狂犬病毒免疫群。 基于以上問(wèn)題，本課題分別從制劑學(xué)，免疫學(xué)方面展開(kāi)對(duì)狂犬病毒口服疫苗的研究，以期能夠?yàn)榭袢《酒芈肚懊庖哳A(yù)防提供新的免疫疫苗。 研究目的：本研究以RV雞胚低代毒(Flury-lep)為模型，海藻酸鈉為緩釋材料，劑型選擇制備工藝簡(jiǎn)單的海藻酸鈣緩釋微丸，研制Flury株的口服疫苗。對(duì)制備出的口服疫苗進(jìn)行安全性，有效性，無(wú)菌性研究。 研究方法：采用單因素實(shí)驗(yàn)和正交試驗(yàn)相結(jié)合的方法優(yōu)化工藝處方，篩選最佳工藝處方制備出疫苗成品，轉(zhuǎn)籃法測(cè)定成品的體外累積釋放曲度，參照中國(guó)生物制品規(guī)程進(jìn)行成品疫苗的無(wú)菌檢驗(yàn)。采用MTT法研究口服疫苗細(xì)胞毒性試驗(yàn)，以WHO規(guī)定的方法研究口服疫苗體內(nèi)毒性試驗(yàn)，以普通昆明小鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行疫苗免疫效力實(shí)驗(yàn),分別研究疫苗的體液免疫效果和細(xì)胞免疫效果。 研究結(jié)果：本課題制備出包封率78.64±2.144%，載藥量17.49±1.43%的微丸，體外毒性試驗(yàn)表明微丸在每實(shí)驗(yàn)孔高達(dá)0.5mg的藥量下，作用120h，仍然不會(huì)對(duì)L929細(xì)胞生長(zhǎng)造成影響，體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果表明小鼠正常生長(zhǎng)，無(wú)明顯異常反應(yīng)。流式分析小鼠外周血淋巴細(xì)胞(?)和(?)數(shù)目，結(jié)果表明(?)和(?)數(shù)目分別由25.81±3.21%和20.51±2.26%上升到41.91±2.32%和25.70±2.11%，(?)/(?)的值也由1.26±0.31上升到1.63±0.68,說(shuō)明小鼠有了較高的細(xì)胞免疫反應(yīng)。體液免疫檢測(cè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物外周血中和抗體效價(jià)為1/80。無(wú)菌試驗(yàn)中各培養(yǎng)基未見(jiàn)細(xì)菌生長(zhǎng)。 研究結(jié)論：本課題初步研究了以Flury株為模型的狂犬病口服疫苗，并得到了良好的免疫效果，能夠?yàn)閯?dòng)物口服疫苗的研究提供一個(gè)新的研究方向。
【關(guān)鍵詞】：狂犬病疫苗 Flury毒株 疫苗
【學(xué)位授予單位】：重慶理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-12
• 英文縮寫12-13
• 第1章 緒論13-23
• 1.1 狂犬病毒的形態(tài)與結(jié)構(gòu)特征13-14
• 1.2 狂犬病毒的檢測(cè)14-16
• 1.2.1 傳統(tǒng)的生物學(xué)檢測(cè)方法15
• 1.2.2 檢測(cè)狂犬病毒抗原15-16
• 1.2.3 檢測(cè)狂犬病毒核酸16
• 1.3 狂犬病的流行病學(xué)特征16-18
• 1.3.1 狂犬病的臨床表現(xiàn)16-17
• 1.3.2 我國(guó)狂犬病的流行特點(diǎn)17
• 1.3.3 狂犬病的分子流行病學(xué)特點(diǎn)17-18
• 1.4 狂犬病疫苗的研究進(jìn)展18-19
• 1.4.1 亞單位疫苗18
• 1.4.2 合成肽疫苗18
• 1.4.3 DNA 疫苗18
• 1.4.4 基因重組減毒疫苗18-19
• 1.4.5 重組活載體疫苗19
• 1.5 狂犬病口服疫苗的研究原則19-23
• 1.5.1 狂犬病口服疫苗的主要研究類型20-21
• 1.6.1 研究背景和目標(biāo)21-22
• 1.6.2 主要研究?jī)?nèi)容22
• 1.6.3 主要技術(shù)路線22-23
• 第二章 狂犬病毒的增殖和效價(jià)的測(cè)定23-29
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料、試劑和儀器23-24
• 2.1.1 主要實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，細(xì)胞和病毒23
• 2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑23
• 2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器和耗材23-24
• 2.1.4 主要溶液的配制24
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法24-25
• 2.2.1 BHK-21 細(xì)胞的培養(yǎng)24
• 2.2.2 病毒的接種24-25
• 2.2.3 采用 05 版藥典規(guī)定的小鼠顱內(nèi)接種實(shí)驗(yàn)測(cè)定病毒的滴度 LD5025
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-26
• 2.3.1 BHK-21 細(xì)胞的培養(yǎng)25
• 2.3.2 病毒的增殖及病毒滴度的測(cè)定25-26
• 2.4 本章討論26-29
• 第三章 狂犬病毒海藻酸鈉微丸的研制29-43
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料、試劑和儀器29-31
• 3.1.1 主要實(shí)驗(yàn)動(dòng)物29
• 3.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑29
• 3.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器及廠家29-30
• 3.1.4 主要實(shí)驗(yàn)試劑的配制方法30-31
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法31-35
• 3.2.1 BRADFORD 法檢測(cè)蛋白濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立31
• 3.2.2 增殖病毒的蛋白含量測(cè)定31-32
• 3.2.3 狂犬病毒口服疫苗微丸的工藝優(yōu)化方法和質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)32-33
• 3.2.4 狂犬病毒口服疫苗微丸工藝的單因素實(shí)驗(yàn)33
• 3.2.5 狂犬病毒口服疫苗微丸工藝的正交實(shí)驗(yàn)33-34
• 3.2.6 最佳工藝研制微丸的質(zhì)量考察34-35
• 3.2.7 最佳工藝研制微丸的病毒滴度的測(cè)定35
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果35-40
• 3.3.1 bradford 法檢測(cè)蛋白濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立35
• 3.3.2 增殖病毒液中蛋白含量的確定35
• 3.3.3 狂犬病毒口服疫苗微丸工藝的單因素實(shí)驗(yàn)35-37
• 3.3.4 狂犬病毒口服疫苗微丸工藝的正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果37-38
• 3.3.5 最佳工藝制備的微丸：38-39
• 3.3.6 最佳工藝制備微丸的病毒滴度的測(cè)定39-40
• 3.4 本章討論40-43
• 第四章 狂犬病毒口服疫苗的無(wú)菌試驗(yàn)43-47
• 4.1 實(shí)驗(yàn)材料、試劑和儀器43-45
• 4.1.1 主要實(shí)驗(yàn)試劑43
• 4.1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器43
• 4.1.3 主要試劑的配制43-45
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法45
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果45
• 4.4 本章討論45-47
• 第五章 狂犬病毒口服疫苗的安全試驗(yàn)47-53
• 5.1 實(shí)驗(yàn)材料、試劑和儀器47-48
• 5.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和細(xì)胞47
• 5.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑47
• 5.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器47-48
• 5.1.4 主要實(shí)驗(yàn)試劑的配制48
• 5.2 口服疫苗微丸的體外毒性試驗(yàn)48-49
• 5.2.1 L929 細(xì)胞的培養(yǎng)48
• 5.2.2 MTT 法測(cè)定口服疫苗微丸的體外毒性試驗(yàn)48-49
• 5.3 口服疫苗微丸的體內(nèi)毒性試驗(yàn)49
• 5.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果49-50
• 5.4.1 口服疫苗微丸的體內(nèi)毒性試驗(yàn)49-50
• 5.4.2 口服疫苗微丸的體外毒性試驗(yàn)50
• 5.5 本章討論50-53
• 第六章 狂犬病毒口服疫苗的效力試驗(yàn)53-61
• 6.1 實(shí)驗(yàn)材料、試劑和儀器53-54
• 6.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物53
• 6.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑53
• 6.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器53
• 6.1.4 主要試劑的配制53-54
• 6.2 實(shí)驗(yàn)方法54-55
• 6.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的免疫：54
• 6.2.2 免疫動(dòng)物的細(xì)胞免疫實(shí)驗(yàn)：54-55
• 6.2.3 免疫動(dòng)物的體液免疫實(shí)驗(yàn)：55
• 6.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果55-57
• 6.3.1 細(xì)胞免疫實(shí)驗(yàn)結(jié)果55-57
• 6.3.2 體液免疫結(jié)果57
• 6.4 本章討論57-61
• 第七章 全文總結(jié)及后續(xù)工作建議61-63
• 7.1 全文總結(jié)61-62
• 7.2 后續(xù)工作建議62
• 7.3 展望62-63
• 參考文獻(xiàn)63-67
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷、在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及取得的研究成果67

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 李理;口服免疫機(jī)制及口服疫苗的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志;2004年05期

2 姜燕;呂昌龍;;口服疫苗與腸粘膜免疫效應(yīng)機(jī)制[J];國(guó)際免疫學(xué)雜志;2006年05期

3 陳陽(yáng);王寶華;伍丹;;聚丙烯酸樹(shù)脂類輔料在制劑中的應(yīng)用[J];中國(guó)藥業(yè);2007年14期

本文編號(hào)：709780