本文關(guān)鍵詞：未成熟睪丸組織體外生殖細(xì)胞發(fā)育的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的建立睪丸組織體外培養(yǎng)模型，比較胎牛血清（FBS）和血清替代物-KnockoutTMSR(KSR)對睪丸組織生長發(fā)育的影響，觀察SD大鼠和人未成熟睪丸組織在體外培養(yǎng)條件下生殖細(xì)胞發(fā)育情況。 方法 ①SD大鼠未成熟睪丸組織分別采用FBS和KSR連續(xù)培養(yǎng)5周,觀測培養(yǎng)睪丸組織大體面積,蘇木素-伊紅(HE)染色觀察睪丸組織學(xué)形態(tài)及生殖細(xì)胞發(fā)育,并測量曲細(xì)精管直徑。TUNEL凋亡實(shí)驗(yàn)觀察培養(yǎng)5周睪丸組織中的凋亡細(xì)胞, RT-PCR檢測精子發(fā)生不同階段的標(biāo)記基因Kit、Sycp3、Crisp1。 ②取睪丸腫瘤術(shù)中的瘤旁睪丸組織進(jìn)行體外培養(yǎng)，，分別培養(yǎng)4w-17w，蘇木素-伊紅（HE）染色觀察培養(yǎng)睪丸組織的組織學(xué)結(jié)構(gòu)，測量曲細(xì)精管橫截面積和直徑，RT-PCR檢測Piwil2基因在培養(yǎng)組織中的表達(dá)，免疫組化檢測Piwil2蛋白在生殖細(xì)胞中的表達(dá)。 結(jié)果 ①KSR組睪丸組織體外持續(xù)生長,曲細(xì)精管逐漸增大,培養(yǎng)5周觀察到精原細(xì)胞、初級精母細(xì)胞、次級精母細(xì)胞、圓形精子細(xì)胞,RT-PCR檢測到Kit、Sycp3、Crisp1的表達(dá)。FBS組睪丸組織隨著培養(yǎng)時(shí)間延長逐漸萎縮,培養(yǎng)5周曲細(xì)精管中出現(xiàn)明顯壞死,培養(yǎng)睪丸組織中Sycp3、Crisp1表達(dá)不穩(wěn)定。 ②人睪丸組織培養(yǎng)初期（4w）曲細(xì)精管橫截面積和直徑逐漸增大，培養(yǎng)后期有減小趨勢。培養(yǎng)8w后曲細(xì)精管中觀察到類初級精母細(xì)胞，Piwil2免疫組化染色提示生殖細(xì)胞具有自我更新分化能力。 結(jié)論 ①KSR更利于未成熟睪丸組織培養(yǎng)中生殖細(xì)胞從精原細(xì)胞發(fā)育成精子細(xì)胞,并能長期維持生殖細(xì)胞發(fā)育、睪丸組織生長。 ②在體外培養(yǎng)條件下人未成熟睪丸組織中精原細(xì)胞可發(fā)育成精母細(xì)胞。培養(yǎng)8w生殖細(xì)胞仍然具有自我更新和分化能力，之后生殖細(xì)胞發(fā)育逐漸衰退。
【關(guān)鍵詞】：睪丸 組織培養(yǎng) 精子發(fā)育
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R321.1
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-6
• 摘要6-8
• ABSTRACT8-11
• 前言11-15
• 參考文獻(xiàn)13-15
• 第一部分 胎牛血清和血清替代物-Knockout~TMSR 對未成熟睪丸體外生殖細(xì)胞發(fā)育的影響15-30
• 1. 材料和方法15-21
• 2. 結(jié)果21-26
• 3. 討論26-28
• 4. 小結(jié)28-29
• 參考文獻(xiàn)29-30
• 第二部分 人未成熟睪丸組織體外生殖細(xì)胞發(fā)育的實(shí)驗(yàn)研究30-39
• 1 材料和方法30-32
• 2 結(jié)果32-36
• 3 討論36-37
• 4 小結(jié)37-38
• 參考文獻(xiàn)38-39
• 全文總結(jié)39-40
• 文獻(xiàn)綜述40-49
• 參考文獻(xiàn)44-49
• 致謝49-50
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄50-51

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

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本文編號(hào)：688735