發(fā)布時間：2017-08-17 11:13

  本文關(guān)鍵詞：錦燈籠莖水溶性多糖及電穿孔在核酸疫苗中免疫增強(qiáng)作用研究

  更多相關(guān)文章： 錦燈籠莖水溶性多糖 核酸疫苗 電穿孔 免疫保護(hù) 佐劑 白色念珠

【摘要】：錦燈籠又名酸漿、紅姑娘、燈籠草等，為茄科酸漿屬、多年生宿根草本植物，其宿存的花萼、全草及根均可入藥。錦燈籠植株含酸漿醇A、B；苗、葉、莖含酸漿苦味素A、B、C、酸漿果紅素、生物堿、構(gòu)椽酸等人類生長不可多得的微量物質(zhì)。近幾年，隨著對植物多糖研究的逐步深入，人們發(fā)現(xiàn)很多植物多糖都具有良好的免疫調(diào)節(jié)功能。多糖不僅能有效激活免疫細(xì)胞、提高機(jī)體免疫能力，而且對宿主正常細(xì)胞沒有直接的毒副作用，因此被認(rèn)為是一種重要的生物效應(yīng)調(diào)節(jié)劑。本論文以錦燈籠莖水溶性多糖為研究對象研究其在核酸疫苗中免疫增強(qiáng)的效果。研究表明，錦燈籠莖水溶性多糖具有顯著的免疫增強(qiáng)作用。 以錦燈籠莖水溶性多糖（WSP）作為疫苗佐劑與核酸疫苗共同免疫ICR雄性小鼠。免疫方式為脛前肌肌肉注射及脛前肌肌肉注射后進(jìn)行電穿孔刺激，共免疫兩次，免疫間隔時間為14天，第二次免疫14天后對免疫小鼠進(jìn)行眼球取血，分離抗血清。通過下列實(shí)驗(yàn)來研究WSP及電穿孔的免疫增強(qiáng)作用：Western Blot檢測免疫小鼠抗血清中抗體的特異性；ELISA檢測抗血清中特異性抗體滴度；ELISA試劑盒檢測抗血清中IL-2、IL-4、IL-10以及IL-12的含量；免疫保護(hù)實(shí)驗(yàn)研究WSP及電穿孔對pD-HSP90C免疫小鼠抗系統(tǒng)性白色念珠菌感染的影響。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，pD-HSP90C作為核酸疫苗，能夠誘發(fā)免疫小鼠血清中產(chǎn)生特異性抗體。WSP作為疫苗佐劑與核酸疫苗共同免疫小鼠后，，與單獨(dú)注射核酸疫苗組相比，其血清中特異性抗體IgG、IgG1和IgG2b滴度及IL-2、IL-4、IL-10和IL-12含量顯著增高；通過脛前肌肌肉注射后進(jìn)行電穿孔刺激的小鼠組分與直接脛前肌肌肉注射小鼠組分相比，這些特異性抗體及細(xì)胞因子含量同樣顯著提高。免疫保護(hù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，WSP與核酸疫苗共同免疫組小鼠，其腎組織勻漿培養(yǎng)得到的白色念珠菌菌落數(shù)顯著少于核酸疫苗單獨(dú)注射組；通過脛前肌肌肉注射后進(jìn)行電穿孔刺激的小鼠與直接脛前肌肌肉注射小鼠組分相比，菌落數(shù)同樣顯著減少。腎臟組織切片的分析結(jié)果表明，WSP與核酸疫苗共同免疫組小鼠腎小球、腎小管受損程度明顯弱于核酸疫苗單獨(dú)處理組；通過脛前肌肌肉注射后進(jìn)行電穿孔刺激的小鼠與直接脛前肌肌肉注射小鼠組分相比，腎小球、腎小管受損程度明顯減弱。 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明WSP作為核酸疫苗佐劑以及電穿能夠顯著增強(qiáng)小鼠體內(nèi)Th1和Th2免疫應(yīng)答，顯著提高核酸疫苗免疫小鼠抵抗系統(tǒng)性白色念珠菌的感染能力，為WSP在疫苗佐劑領(lǐng)域中的應(yīng)用以及電穿孔的應(yīng)用奠定了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：錦燈籠莖水溶性多糖 核酸疫苗 電穿孔 免疫保護(hù) 佐劑 白色念珠
【學(xué)位授予單位】：東北師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 中英文縮寫9-10
• 第一章 引言10-20
• 1 核酸疫苗簡介10-13
• 1.1 核酸疫苗的免疫機(jī)制10
• 1.2 核酸疫苗的優(yōu)點(diǎn)及不足10-11
• 1.3 免疫途徑、方法和劑量等11-12
• 1.4 電穿孔（electroporation）概述12-13
• 2 佐劑概述13-14
• 2.1 佐劑的概念13
• 2.2 佐劑的作用方式13-14
• 2.3 佐劑的分類14
• 3 植物多糖概述14-16
• 3.1 植物多糖的組成14-15
• 3.2 植物多糖的免疫調(diào)節(jié)作用15
• 3.3 植物多糖的其他作用15-16
• 4 錦燈籠多糖概述16-17
• 4.1 錦燈籠簡介16
• 4.2 錦燈籠藥理作用16-17
• 4.3 錦燈籠莖水溶性多糖簡介17
• 5 白色念珠菌概述17-19
• 5.1 白色念珠菌簡介17-18
• 5.2 白色念珠菌感染致病機(jī)理18
• 5.3 白色念珠菌熱休克蛋白 9018-19
• 6 本研究目的及意義19-20
• 第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法20-35
• 1 實(shí)驗(yàn)材料及儀器20-22
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料20
• 1.2 實(shí)驗(yàn)試劑20-21
• 1.3 實(shí)驗(yàn)儀器21-22
• 2 實(shí)驗(yàn)方法22-35
• 2.1 核酸疫苗 pD-HSP90C 的制備及酶切驗(yàn)證22-25
• 2.2 重組蛋白 rP-HSP90C 的誘導(dǎo)表達(dá)、純化25-26
• 2.3 WSP 及電穿孔在核酸疫苗 pD-HSP90C 中免疫增強(qiáng)作用研究26-27
• 2.4 Western blot 檢測免疫小鼠抗血清中抗體特異性27-29
• 2.5 ELISA 檢測免疫小鼠抗血清中抗 rP-HSP90C 特異性抗體滴度29-30
• 2.6 ELISA 試劑盒檢測免疫小鼠抗血清中細(xì)胞因子的含量30-31
• 2.7 免疫后小鼠抗系統(tǒng)性白色念珠菌感染的免疫保護(hù)作用研究31-34
• 2.8 數(shù)據(jù)分析34-35
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析35-52
• 1 核酸疫苗 pD-HSP90C 的酶切鑒定35-36
• 2 重組蛋白 rP-HSP90C SDS-PAGE 分析36
• 3 WSP 及電穿孔免疫增強(qiáng)作用分析36-52
• 3.1 Western blot 檢測免疫小鼠抗血清中抗體的特異性36-38
• 3.2 WSP 及電穿孔對免疫小鼠抗血清中抗 rP-Hsp90C 特異性抗體滴度的影響38-42
• 3.3 WSP 及電穿孔對 pD-HSP90C 免疫小鼠抗血清中細(xì)胞因子的影響42-46
• 3.4 WSP 及電穿孔對免疫小鼠抗系統(tǒng)性白色念珠菌感染的免疫保護(hù)作用46-52
• 第四章 討論52-56
• 1 WSP 增強(qiáng)了核酸疫苗 pD-HSP90C 免疫小鼠的 Th1 型和 Th2 型免疫應(yīng)答及抗系統(tǒng)性白色念珠菌感染的能力52-54
• 1.1 WSP 增強(qiáng)了核酸疫苗 pD-HSP90C 免疫小鼠的 Th1 型和 Th2 型免疫應(yīng)答52-53
• 1.2 WSP 增強(qiáng)了核酸疫苗 pD-HSP90C 免疫小鼠抗系統(tǒng)性白色念珠菌感染的能力53-54
• 2 電穿孔增強(qiáng)了核酸疫苗 pD-HSP90C 免疫小鼠的 Th1 型和 Th2 型免疫應(yīng)答和抗系統(tǒng)性白色念珠菌感染的能力54-56
• 2.1 電穿孔增強(qiáng)了核酸疫苗 pD-HSP90C 免疫小鼠的 Th1 和 Th2 型免疫應(yīng)答54
• 2.2 電穿孔增強(qiáng)了核酸疫苗 pD-HSP90C 免疫小鼠抗系統(tǒng)性白色念珠菌感染的能力54-56
• 結(jié)論56-57
• 1 WSP 增強(qiáng)了核酸疫苗 pD-HSP90C Th1 和 Th2 免疫應(yīng)答和抗系統(tǒng)性白色念珠菌感染的能力56
• 2 電穿孔增強(qiáng)了核酸疫苗 pD-HSP90C Th1 和 Th2 免疫應(yīng)答和抗系統(tǒng)性白色念珠菌感染的能力56-57
• 參考文獻(xiàn)57-60
• 致謝60

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：688692