本文關(guān)鍵詞：染料木黃酮對裸鼠卵巢癌移植瘤模型的影響

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【摘要】：目的：卵巢癌是危害女性健康的三大婦科惡性腫瘤之一，由于缺乏早期診斷的方法，大多患者就診時已處于晚期階段。以腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)為主的手術(shù)治療，很難做到徹底治愈，接下來需要化療來維持治療，在女性生殖道惡性腫瘤中死亡率居于首位。雖然以鉑類為主的聯(lián)合化療的應(yīng)用在多數(shù)卵巢癌中起效，但是由于長期化療的毒性作用、化療藥物耐藥及停藥后復(fù)發(fā)等問題，使化療的應(yīng)用，特別是在晚期卵巢癌的治療上受到限制，在過去30年里，患者的長期生存率沒有多少改善，患者5年生存率僅為20%左右。為解決這些問題，尋找新的更好的既能殺滅腫瘤細(xì)胞又能降低系統(tǒng)毒性的聯(lián)合化療方案成為主要研究的方向。 染料木黃酮，英文名稱為Genistein，化學(xué)名為4，,5,7-三羥基異黃酮，為弱植物雌激素，主要存在于大豆等食物中。體內(nèi)外研究表明染料木黃酮在抑制乳腺癌、前列腺癌和結(jié)腸癌腫瘤細(xì)胞生長方面有巨大作用。流行病學(xué)研究也發(fā)現(xiàn)，長期攝取大豆食品能降低乳腺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、頭頸癌等的發(fā)生率，這主要?dú)w功于染料木黃酮。染料木黃酮在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展階段存在著多重的抑制效應(yīng)，其抗腫瘤機(jī)制為調(diào)節(jié)雌激素受體、抑制酪氨酸蛋白激酶活性、抑制血管形成、增強(qiáng)抗氧化酶的活性、調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶的活性等，與多種腫瘤的發(fā)生低風(fēng)險有關(guān)。染料木黃酮也可作為一種輔助治療藥物，提高腫瘤細(xì)胞對放療的敏感性，增強(qiáng)化療藥物的抗腫瘤作用，降低腫瘤的復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移。流行病學(xué)調(diào)查、體內(nèi)外實驗及抗癌機(jī)制研究等都表明，染料木黃酮具有一定程度的抑癌和防癌作用，但目前對染料木黃酮的研究也有相互矛盾的結(jié)果，需要更多的體內(nèi)實驗以證實。此外，尚需大樣本的、前瞻性的研究來評估染料木黃酮的抗腫瘤作用，從而為卵巢癌及其他惡性腫瘤的預(yù)防及治療提供更有力的證據(jù)。毫無疑問，大豆異黃酮類植物雌激素有著廣泛的臨床應(yīng)用前景，有待于進(jìn)一步研究。關(guān)于染料木黃酮對卵巢癌的體內(nèi)研究尚少。本實驗以人卵巢癌裸鼠移植瘤為模型,研究了染料木黃酮及其與紫杉醇聯(lián)合應(yīng)用對移植瘤的影響，為染料木黃酮在卵巢癌的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。 方法： 1細(xì)胞培養(yǎng)：體外常規(guī)培養(yǎng)人卵巢漿液性乳頭狀囊腺癌細(xì)胞株SKOV3，待細(xì)胞長到對數(shù)生長期，用胰蛋白酶消化成單個細(xì)胞，分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。 2試驗藥物的制備： 染料木黃酮的制備：Genistein由RPMI-1640配制成儲備液（濃度30mg/ml），保存于-20℃冰箱，，實驗時再稀釋為所需濃度（5mg/ml）。 紫杉醇注射液制備：用0.9%氯化鈉注射液稀釋成3mg/ml濃度，即刻使用。 3實驗動物模型的建立及分組：實驗動物采用無胸腺裸小鼠，共24只，雌性，4-5周齡，體重16-20克。將SKOV3細(xì)胞用磷酸鹽緩沖液(PBS)稀釋成25×106個/ml的濃度，無菌條件下接種于裸鼠背側(cè)近后肢處皮下，每只0.2ml。隨機(jī)分成對照組、染料木黃酮組、紫杉醇組、染料木黃酮+紫杉醇聯(lián)合用藥組。 4給藥方法：接種7天后開始給藥，染料木黃酮組按照每只50mg/kg灌胃，每天一次，共四周。紫杉醇組按照每只30mg/kg給予腹腔注射，每周一次，共四周。聯(lián)合用藥組按照每天給予染料木黃酮50mg/kg灌胃，每周給予紫杉醇30mg/kg腹腔注射，共四周。對照組每天灌胃相同體積的RPMI1640，每周腹腔注射相同體積的生理鹽水，共四周。 5檢測指標(biāo)： 5.1裸鼠重量和移植瘤體積、重量：每天觀察裸鼠精神、飲食、二便，治療開始及每周末測量裸鼠體重及移植瘤的最長徑（a）及最短徑（b），根據(jù)公式計算移植瘤體積。停藥24小時后處死裸鼠，剝?nèi)∧[瘤組織，測量其重量。根據(jù)公式計算抑瘤率。 5.2將腫瘤組織制作組織切片，在光鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化。 5.3用RT-qPCR技術(shù)檢測腫瘤組織中miRNAlet-7的表達(dá)。 5.4免疫組化檢測腫瘤組織中cyclinG2的表達(dá)。 6統(tǒng)計學(xué)方法：采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計量資料多樣本均數(shù)間比較采用析因設(shè)計資料的方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。等級資料進(jìn)行秩轉(zhuǎn)換后采用SNK方法兩兩比較。 結(jié)果： 1各組用藥對裸鼠體重、移植瘤體積、重量及抑瘤率的影響：四組裸鼠體重?zé)o明顯變化。裸鼠無明顯精神萎靡、飲食不振、腹瀉等情況。實驗組移植瘤體積增長較對照組緩慢，用藥第29天實驗組的移植瘤體積均小于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。聯(lián)合用藥組移植瘤的體積小于單一用藥組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。實驗組的移植瘤重量均小于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，聯(lián)合用藥組的移植瘤重量小于單一用藥組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。聯(lián)合用藥組抑瘤率高于單一用藥組。 2各組腫瘤組織形態(tài)學(xué)變化：各組腫瘤組織切片光鏡下可見瘤細(xì)胞具有異型性，實驗組較對照組異型性程度低，可見核固縮、碎裂，其中聯(lián)合用藥組最明顯。 3各組腫瘤組織中miRNAlet-7的表達(dá)情況：實驗組腫瘤組織中miRNAlet-7的表達(dá)均高于對照組，聯(lián)合用藥組高于單一用藥組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 4各組腫瘤組織中cyclinG2的表達(dá)情況：用藥組腫瘤組織中cyclinG2的表達(dá)均高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。聯(lián)合用藥組高于單一用藥組，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論： 1用藥29天染料木黃酮組及聯(lián)合用藥組移植瘤的體積、重量均小于對照組，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義，聯(lián)合用藥組的抑瘤率高于單一用藥組，表明染料木黃酮具有抑制卵巢癌細(xì)胞生長的作用，且與紫杉醇聯(lián)合應(yīng)用能增強(qiáng)抗腫瘤的效果。 2染料木黃酮組及聯(lián)合用藥組移植瘤組織中miRNAlet-7的表達(dá)均高于對照組，聯(lián)合用藥組最高，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義，表明染料木黃酮有抑制原癌基因從而抗腫瘤的作用，并能增強(qiáng)紫杉醇的化療作用。 3染料木黃酮組及聯(lián)合用藥組移植瘤組織中cyclinG2的表達(dá)均高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，聯(lián)合用藥組表達(dá)最高，表明染料木黃酮有通過阻斷細(xì)胞周期，抑制細(xì)胞增殖而起到抑制卵巢癌轉(zhuǎn)移的作用，并能增強(qiáng)紫杉醇的化療作用。
【關(guān)鍵詞】：染料木黃酮 卵巢癌 紫杉醇 miRNAlet-7 cyclinG2
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R737.31;R-332
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-12
• 前言12
• 材料與方法12-19
• 結(jié)果19-22
• 附圖22-28
• 附表28-30
• 討論30-33
• 結(jié)論33-34
• 參考文獻(xiàn)34-38
• 綜述 卵巢癌治療進(jìn)展38-45
• 參考文獻(xiàn)42-45
• 致謝45-46
• 個人簡歷46

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 田玉樓,劉芙蓉,劉潔,姜莉,羅陽,張學(xué);Cyclin G2抑制腫瘤細(xì)胞增殖的研究[J];癌癥;2002年06期

2 韋紅梅;周靜;戎嶸;朱俊東;;大豆異黃酮激活PPARγ促進(jìn)人前列腺癌DU-145細(xì)胞凋亡[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2012年01期

3 孫勇;倪才方;劉一之;鄒建偉;朱曉黎;金泳海;;腸系膜下動脈在晚期卵巢癌及其術(shù)后復(fù)發(fā)介入治療中的價值[J];介入放射學(xué)雜志;2009年04期

4 楊超;金泳海;鄒建偉;劉一之;朱曉黎;陳瓏;沈健;李智;倪才方;胡建銘;;術(shù)前介入性化療栓塞治療卵巢癌63例療效評估[J];介入放射學(xué)雜志;2011年05期

5 張玉坤;王導(dǎo)新;李長毅;;染料木黃酮對大鼠慢性栓塞性肺動脈高壓的減緩作用及其機(jī)制[J];中國生物制品學(xué)雜志;2012年03期

6 黃萬中;蔣華;江繼發(fā);劉倩;;紫杉醇腹腔灌注化療治療晚期卵巢癌臨床研究[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2012年02期

7 賈晉松,徐世榮,馬R

本文編號：683185