本文關(guān)鍵詞：Angiopep-2修飾的腦靶向基因傳遞載體的研究

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【摘要】：隨著分子生物學(xué)的發(fā)展與科學(xué)技術(shù)的進步，基因治療逐漸成為各種中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的新型治療方法。如何跨越血腦屏障，將治療基因有效遞送到腦中病變部位，是一個亟待解決的關(guān)鍵問題。安全性好、轉(zhuǎn)染效率高且不受體內(nèi)環(huán)境干擾，能有效通過血腦屏障，理想的腦靶向基因傳遞載體必須同時滿足上述要求。 本課題將PEI/DNA復(fù)合物與脂質(zhì)體聯(lián)合使用，制備得到脂質(zhì)體、PEI、DNA的三元復(fù)合物，并在復(fù)合物上連接PEG和腦靶向肽Angiopep-2，使復(fù)合物具有腦靶向的功能。 首先對制備PEI/DNA復(fù)合物的相關(guān)影響因素（制備溶劑PH、離子強度、制備溫度、復(fù)合比例等）進行系統(tǒng)考察，通過對復(fù)合物粒徑、表面電位等理化性質(zhì)研究，確定了得到較小粒徑PEI/DNA復(fù)合物的制備條件，即室溫下、溶劑PH在3～7、離子強度小于0.02mol/L、PEI與DNA復(fù)合比例（N/P）為4～10。隨后選擇在基本符合上述條件的三種溶劑體系中制備PEI/DNA復(fù)合物，MTT法檢測復(fù)合物的細胞毒性，并用pGL-3質(zhì)粒評價復(fù)合物在Hela細胞中的轉(zhuǎn)染效率，最終確定了以去離子水作為溶劑、N/P為8的條件下制備PEI/DNA復(fù)合物。 在此基礎(chǔ)上，將脂質(zhì)體加入PEI/DNA形成三元復(fù)合物，以期降低PEI的毒性。通過對復(fù)合物的粒徑、表面電位、細胞毒性及轉(zhuǎn)染效率的檢測，可制備得到粒徑小于200nm、電位20mV左右的pCaLip/PEI/DNA三元復(fù)合物，該復(fù)合物具有較高的轉(zhuǎn)染效率和良好的安全性，且在10%血清存在條件下其轉(zhuǎn)染效率不受影響。 隨后進一步將腦靶向肽Angiopep-2與PEG化的磷脂共價連接，經(jīng)核磁共振確證連接。制備腦靶向三元復(fù)合物，粒徑、電位分別為180nm、15mv。MTT法檢測其具有較好的安全性，細胞存活率90%以上。細胞轉(zhuǎn)染結(jié)果表明，靶向復(fù)合物與未經(jīng)靶向修飾的復(fù)合物相比，在陽性細胞hCMEC/D3和C6細胞中的轉(zhuǎn)染顯著提高（P0.05），而在陰性細胞Hela中無明顯變化。建立人大腦微血管內(nèi)皮細胞（hCMEC/D3）BBB細胞模型，，并在該模型上考察三元復(fù)合物的血腦屏障透過性。結(jié)果表明本文制備的腦靶向三元復(fù)合物能夠有效促進質(zhì)粒透過血腦屏障細胞模型。用上述腦靶向三元復(fù)合物攜載TRAIL質(zhì)�？疾炱鋵BB模型下層C6細胞的殺傷作用，結(jié)果顯示與未經(jīng)靶向修飾的載體組相比其具有更顯著的腫瘤細胞殺傷效果。 綜上所述，本文成功制備了Angiopep-2修飾的脂質(zhì)體/PEI/DNA三元復(fù)合基因傳遞載體，體外研究表明該載體具有較好的安全性和較高的轉(zhuǎn)染效率，能夠成功透過血腦屏障模型，是一種有潛力的腦靶向基因傳遞載體。
【關(guān)鍵詞】：腦靶向 Angiopep-2 PEI 脂質(zhì)體 基因傳遞
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R3416;R450
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-12
• 第一章 前言12-23
• 1.1 基因治療概述12-13
• 1.2 非病毒載體的種類13-17
• 1.2.1 陽離子多聚物載體13-16
• 1.2.2 陽離子脂質(zhì)體（脂質(zhì)復(fù)合物）載體16-17
• 1.2.3 非病毒載體的聯(lián)合使用17
• 1.3 腦靶向傳遞系統(tǒng)17-21
• 1.3.1 血腦屏障（BBB）17-19
• 1.3.2 腦靶向納米傳遞載體19-21
• 1.4 本文立題依據(jù)及實驗設(shè)計21-23
• 第二章 實驗材料和方法23-33
• 2.1 材料、試劑及儀器23-25
• 2.1.1 材料23-24
• 2.1.2 所用主要試劑24
• 2.1.3 儀器和設(shè)備24-25
• 2.2 實驗方法25-33
• 2.2.1 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化及提取25
• 2.2.2 質(zhì)粒的質(zhì)量測定25-26
• 2.2.3 PEI/DNA 復(fù)合物相關(guān)影響因素考察26-28
• 2.2.4 脂質(zhì)體與 PEI/DNA 三元復(fù)合物制備及性質(zhì)考察28-29
• 2.2.5 腦靶向三元復(fù)合物制備及表征29-32
• 2.2.6 統(tǒng)計學(xué)分析32-33
• 第三章 結(jié)果與討論33-55
• 3.1 PEI/DNA 的制備及性質(zhì)考察33-38
• 3.1.1 溶劑 PH 值對 PEI/DNA 復(fù)合物制備的影響33-34
• 3.1.2 溶劑離子強度對 PEI/DNA 復(fù)合物制備的影響34
• 3.1.3 溫度對 PEI/DNA 復(fù)合物制備的影響34-35
• 3.1.4 N/P 對 PEI/DNA 復(fù)合物制備的影響35-38
• 3.1.5 小結(jié)38
• 3.2 脂質(zhì)體/PEI/DNA 三元復(fù)合物的制備及性質(zhì)考察38-43
• 3.2.1 脂質(zhì)體荷電對三元復(fù)合物制備的影響38-40
• 3.2.2 PEG 修飾對三元復(fù)合物制備的影響40-42
• 3.2.3 血清對復(fù)合物轉(zhuǎn)染效率的影響42-43
• 3.2.4 小結(jié)43
• 3.3 腦靶向脂質(zhì)體/PEI/DNA 復(fù)合物的制備43-49
• 3.3.1 肽的靶向性評價44-45
• 3.3.2 DSPE-PEG2000-ANG 的合成及表征45-46
• 3.3.3 腦靶向三元復(fù)合物的制備及理化性質(zhì)考察46-47
• 3.3.4 腦靶向三元復(fù)合物的轉(zhuǎn)染效率和細胞毒性考察47
• 3.3.5 小結(jié)47-49
• 3.4 腦靶向三元復(fù)合物的 BBB 通透性考察49-55
• 3.4.1 體外 BBB 細胞模型的建立49-50
• 3.4.2 各種復(fù)合物在 BBB 模型上的透過能力考察50-53
• 3.4.3 各種復(fù)合物攜載治療基因?qū)?C6 細胞的殺傷作用考察53-54
• 3.4.4 小結(jié)54-55
• 全文總結(jié)55-56
• 參考文獻56-61
• 作者簡介、發(fā)表論文和科研情況說明61-62
• 致謝62

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 盧韻;姚靜;周建平;王偉;鄧祖媛;關(guān)麗葉;;聚乙烯亞胺-DNA復(fù)合物的形成和聚集行為研究[J];藥學(xué)學(xué)報;2009年06期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 馬士淇;靶向鼻咽癌細胞的殼聚糖復(fù)合納米基因載體的研究[D];吉林大學(xué);2012年

2 韓曉琳;氫溴酸加蘭他敏鼻腔給藥腦靶向傳遞系統(tǒng)的研究[D];北京化工大學(xué);2009年

本文編號：683287