本文關(guān)鍵詞：miR-144通過(guò)靶向Atg4a調(diào)控卡介苗和雷帕霉素誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞自噬

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【摘要】：目的研究卡介苗(BCG)對(duì)RAW264.7細(xì)胞中與細(xì)胞自噬相關(guān)的miRNA(miR-21、miR-181a、miR-155和miR-144)表達(dá)的影響,并以miR-144為研究對(duì)象,驗(yàn)證miR-144對(duì)自噬相關(guān)基因Atg4a的靶向調(diào)控關(guān)系,探究其在結(jié)核分枝桿菌感染宿主細(xì)胞過(guò)程中調(diào)控細(xì)胞自噬途徑的作用機(jī)制。方法分別對(duì)RAW264.7巨噬細(xì)胞進(jìn)行饑餓處理12 h、50 ng/m L雷帕霉素作用2 h、10 nmol/L 3-甲基腺嘌呤(3-MA)作用12 h;BCG刺激RAW264.7巨噬細(xì)胞12 h、24 h、48 h后,收集細(xì)胞,提取總RNA;利用實(shí)時(shí)定量PCR(qRT-PCR)檢測(cè)miR-21、miR-181a、miR-155及miR-144的表達(dá)水平;構(gòu)建p MIR-Report-Atg4a及p MIR-ReportAtg4a mut重組質(zhì)粒,利用雙螢光素酶報(bào)告系統(tǒng)、qRT-PCR及Western blot法驗(yàn)證miR-144與Atg4a的靶向作用關(guān)系。結(jié)果 BCG刺激RAW264.7巨噬細(xì)胞后,可使miR-21、miR-155及miR-144表達(dá)上調(diào),miR-181a表達(dá)下調(diào);經(jīng)雷帕霉素誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬,4種miRNA表達(dá)量與正常組相比分別上調(diào)約64倍、52倍、14倍、1倍;與正常組相比,3-MA處理細(xì)胞組,miR-21、miR-144、miR-155、miR-181a的表達(dá)量分別下調(diào)1.22倍、1.05倍、1.54倍及12.5倍;雙螢光素酶報(bào)告系統(tǒng)及Western blot法證實(shí),miR-144可靶向作用于Atg4a-3'UTR并抑制其表達(dá)。結(jié)論 miR-144可靶向抑制自噬相關(guān)基因Atg4a的表達(dá),參與調(diào)控RAW264.7巨噬細(xì)胞的自噬過(guò)程。
【作者單位】： 寧夏醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： miR- 結(jié)核分枝桿菌 細(xì)胞自噬 靶向調(diào)控
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(31160494) 教育部“新世紀(jì)優(yōu)秀人才支持計(jì)劃”項(xiàng)目(NCET 11-11023)
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 微小RNA(microRNA,miRNA)是一類長(zhǎng)度約19~24個(gè)核苷酸的內(nèi)源性非編碼RNA分子,主要通過(guò)形成RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體(RNA-inducedsilencing complex,RISC)與靶mRNA 3'端非翻譯區(qū)(3'-untranslated region,3'UTR)互補(bǔ)結(jié)合,誘導(dǎo)或抑制靶mRNA的翻譯[1],并實(shí)現(xiàn)基因在轉(zhuǎn)錄水平后的調(diào)控。已

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 郭倩倩;劉志燕;姜麗麗;胡婷華;李東繁;劉瑩;劉夢(mèng)潔;梁璇;南克俊;;營(yíng)養(yǎng)缺乏對(duì)人肺癌細(xì)胞自噬的誘導(dǎo)作用[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2014年05期

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【共引文獻(xiàn)】

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1 楊先濤;張禎禎;詹學(xué);朱朝敏;;肺結(jié)核患兒外周血單個(gè)核細(xì)胞中microRNA表達(dá)的初步研究[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2013年19期

2 林松;范磊;邵增務(wù);;微RNA調(diào)控自噬研究進(jìn)展[J];國(guó)際骨科學(xué)雜志;2013年05期

3 徐t，

本文編號(hào)：682800