本文關(guān)鍵詞：慢病毒介導(dǎo)豬HOXB4基因在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中表達(dá)的研究

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【摘要】：目的制備豬HOXB4基因重組慢病毒并感染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，，旨在初步探討間充質(zhì)干細(xì)胞轉(zhuǎn)化為造血干細(xì)胞的關(guān)鍵技術(shù)。方法利用4質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞的方法制備豬HOXB4基因重組慢病毒，并感染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BM-MSCs）。⑴豬HOXB4基因表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，采用實時定量PCR及western blot方法檢測質(zhì)粒轉(zhuǎn)染48h后HOXB4基因的表達(dá)情況。⑵采用4質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞的方法制備豬HOXB4基因重組慢病毒并進(jìn)行病毒滴度的測定。⑶摸索豬HOXB4基因重組慢病毒感染BM-MSCs的最適MOI值，并進(jìn)行豬HOXB4基因重組慢病毒感染BM-MSCs。病毒感染72h后，實時定量PCR及western blot方法檢測HOXB4基因的表達(dá)，實時定量PCR法檢測細(xì)胞中造血相關(guān)因子RUNX1、GATA2、SCL/TAL1的表達(dá)，流式細(xì)胞術(shù)檢測病毒感染后細(xì)胞周期時相的變化，倒置顯微鏡下觀察病毒感染后細(xì)胞形態(tài)的變化。結(jié)果⑴豬HOXB4基因表達(dá)質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞48h后，實時定量PCR及western blot方法均檢測到HOXB4基因的高表達(dá)；質(zhì)粒構(gòu)建成功。⑵成功制備豬HOXB4基因重組慢病毒，病毒滴度為2×10~9TU/ml。⑶豬HOXB4基因重組慢病毒感染BM-MSCs，最適MOI值為30；病毒感染72h后，BM-MSCs中可見HOXB4基因和蛋白的高表達(dá)；倒置顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)BM-MSCs細(xì)胞形態(tài)出現(xiàn)了明顯的變化，細(xì)胞偽足收縮向細(xì)胞靠攏，由長梭形逐漸變成橢圓形或半橢圓形；病毒感染BM-MSCs72h后，G0/G1期細(xì)胞明顯增加，S期細(xì)胞明顯下降，細(xì)胞處于靜止期，細(xì)胞中造血相關(guān)因子RUNX1、GATA2明顯升高、SCL/TAL1未見明顯變化。結(jié)論本實驗成功制備了高滴度的豬HOXB4基因重組慢病毒，感染BM-MSCs后發(fā)現(xiàn)HOXB4基因能夠誘導(dǎo)BM-MSCs發(fā)生形態(tài)學(xué)變化并使細(xì)胞處于靜止期和上調(diào)造血相關(guān)因子GATA2、RUNX1的表達(dá)，初步探討了HOXB4基因在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中的作用，為后續(xù)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向造血干細(xì)胞轉(zhuǎn)化、HOXB4基因轉(zhuǎn)入間充質(zhì)干細(xì)胞對免疫相關(guān)性疾病干細(xì)胞分化的影響及造血干細(xì)胞移植治療腫瘤和免疫相關(guān)性疾病的實驗研究奠定了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：HOXB4 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 慢病毒
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• ABSTRACT5-9
• 英文縮寫注解9-11
• 第1章 緒論11-13
• 第2章 綜述13-20
• 2.1 HOXB4 基因及其與造血的關(guān)系13-16
• 2.2 間充質(zhì)干細(xì)胞的研究進(jìn)展16-20
• 第3章 豬 HOXB4 基因表達(dá)質(zhì)粒的檢測20-31
• 3.1 目的20
• 3.2 材料20-22
• 3.3 方法及步驟22-28
• 3.4 結(jié)果28-30
• 3.5 結(jié)論30-31
• 第4章 豬 HOXB4 基因重組慢病毒的制備31-35
• 4.1 目的31
• 4.2 材料31
• 4.3 方法及步驟31-33
• 4.4 結(jié)果33-34
• 4.5 結(jié)論34-35
• 第5章 豬HOXB4基因重組慢病毒感染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及其功能的檢測35-42
• 5.1 目的35
• 5.2 材料35
• 5.3 方法及步驟35-37
• 5.4 結(jié)果37-41
• 5.5 結(jié)論41-42
• 第6章 討論42-45
• 第7章 結(jié)論45-46
• 第8章 展望46-47
• 參考文獻(xiàn)47-55
• 作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果55-56
• 致謝56

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 唐宇宏,費(fèi)小明,沈文怡,繆扣榮,崔毓桂,陸化,汪承亞;定量PCR檢測體外擴(kuò)增臍帶血造血干細(xì)胞HOXB4基因的表達(dá)[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2005年07期

2 楊立業(yè),劉相名,惠國楨,費(fèi)儉,郭禮和;皮膚間充質(zhì)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)和分化[J];生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志;2005年03期

3 林曉波;何紅燕;羅敏潔;崔冰琳;馮學(xué)永;蔣學(xué)武;謝慶東;黃天華;應(yīng)文娟;馬廉;;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌樣細(xì)胞分化的研究[J];實用兒科臨床雜志;2007年13期

本文編號：678742