本文關(guān)鍵詞：金黃色葡萄球菌的分子特征分析及其對(duì)莫匹羅星的耐藥機(jī)制研究

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【摘要】：研究背景 金黃色葡萄球菌是一種非常普遍的人類(lèi)病原微生物,可以引起多種感染性疾病,包括：皮膚軟組織感染、心內(nèi)膜炎、骨髓炎、菌血癥和致死性肺炎等。臨床上從不同感染組織分離的金黃色葡萄球菌在流行病學(xué)上具有多態(tài)性的特點(diǎn),可以分為不同的克隆株。不同的克隆株其耐藥基因以及毒力因子的攜帶情況是否具有差別,以及金黃色葡萄球菌的表型和分子特征是否具有相關(guān)性等。對(duì)金黃色葡萄球菌的分子特征分析可以幫助我們解決這些問(wèn)題,從而為設(shè)計(jì)有效的預(yù)防和感染措施來(lái)對(duì)抗金黃色葡萄球菌引起的醫(yī)院感染提供依據(jù),監(jiān)控物種進(jìn)化的過(guò)程,并為后續(xù)的機(jī)制研究提供資料。 金黃色葡萄球菌的分子特征分析結(jié)果顯示其對(duì)莫匹羅星的耐藥基因mupA的陽(yáng)性率較高。在臨床上莫匹羅星主要用于清除醫(yī)護(hù)人員和醫(yī)院住院患者金黃色葡萄球菌引起的鼻腔定植。醫(yī)院住院患者金黃色葡萄球菌的鼻腔定植會(huì)大大增加院內(nèi)金黃色葡萄球菌血液感染、透析相關(guān)感染及手術(shù)部位感染的風(fēng)險(xiǎn)。因此對(duì)莫匹羅星耐藥率的監(jiān)測(cè)及耐藥機(jī)制的研究意義重大。 第一部分金黃色葡萄球菌的分子特征分析 目的：分析上海華山醫(yī)院2005到2010年分離自病人不同感染組織的金黃色葡萄球菌的克隆分型特點(diǎn),包括其隨時(shí)間的變化趨勢(shì)及表型與克隆型的聯(lián)系,不同克隆株耐藥和毒力基因攜帶情況及其與克隆分型之間的聯(lián)系。方法：收集上海華山醫(yī)院2005年到2010年從病人不同感染組織中分離鑒定的金黃色葡萄球菌610株,運(yùn)用藥敏紙片法對(duì)所有的菌株進(jìn)行藥物敏感實(shí)驗(yàn)；按照國(guó)際通用的多位點(diǎn)保守基因序列分型(MLST)以及葡萄球菌A蛋白(spa)序列分析方法進(jìn)行克隆株的鑒定分析；用多重PCR方法對(duì)所有耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)菌株進(jìn)行SCCmec分型；采用PCR方法對(duì)其中108株細(xì)菌的耐藥以及毒力基因攜帶情況進(jìn)行分析。結(jié)果：610株金黃色葡萄球菌的克隆分型結(jié)果顯示：共鑒定出20種STs(主要克隆型是：ST239,ST5,ST7,ST188和ST398)和52種spa型(流行株是t002,t037,t030和t601)。共分離出444株MRSA(72.8%)和116株(27.2%)甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌(MSSA). ST239-MRSA-Ⅲ-spa t037和t002是MRSA菌株的兩株流行株。2005到2010年,spa t002和spa t037和他們相應(yīng)的STs(ST5和ST239)是610株金黃色葡萄球菌的流行克隆型,并且對(duì)多種抗生素表型耐藥。不同克隆型的耐藥率不同,但并未檢測(cè)出對(duì)萬(wàn)古霉素、替考拉寧和利奈唑胺耐藥的菌株。不同毒力和耐藥基因在不同克隆株的分布不同。ST239和ST5對(duì)慶大霉素、頭孢西丁、青霉素、頭孢唑林、紅霉素、克林霉素和左氧氟沙星的耐藥率普遍高于其他克隆型,耐消毒劑基因qacA/B在這兩種克隆型中的陽(yáng)性率最高。不同感染組織中ST型的分布是不同的,并隨時(shí)間而變化。近兩年來(lái)(2009和2010年),MRSA菌株的比例下降,以非流行株為主(除ST5和ST239)的MSSA菌株的比例升高,尤其是在血液中。結(jié)論：金黃色葡萄球菌的表型及毒力和耐藥基因的分布與克隆分型有相關(guān)性。近兩年來(lái),以非流行株為主的MSSA菌株的分離率明顯增加,尤其是在血液中。對(duì)臨床金黃色葡萄球菌的持續(xù)監(jiān)測(cè)可為金黃色葡萄球菌的院內(nèi)感染控制提供客觀依據(jù)。 第二部分金黃色葡萄球菌對(duì)莫匹羅星的耐藥表型特征和耐藥機(jī)制研究 目的：分析自上海華山醫(yī)院、山東省立醫(yī)院、溫州醫(yī)學(xué)院第一附院和溫州社區(qū)分離的金黃色葡萄球菌對(duì)莫匹羅星的耐藥表型特征及耐藥機(jī)制。方法：收集了796株金黃色葡萄球菌,其中上海華山醫(yī)院270株,山東省立醫(yī)院185株,溫州醫(yī)學(xué)院第一附院241,溫州社區(qū)100株。采用瓊脂平板篩選法篩選耐藥菌株,并用微量標(biāo)準(zhǔn)肉湯稀釋法對(duì)篩選出來(lái)的耐藥菌株進(jìn)行確認(rèn)。用PCR方法對(duì)其中627株細(xì)菌mupA基因攜帶情況進(jìn)行分析。選取了17株高水平耐藥菌株、9株低水平耐藥菌株和13株敏感菌株,擴(kuò)增ileS基因并測(cè)序,而后與已發(fā)表的金黃色葡萄球菌的ileS基因的標(biāo)準(zhǔn)序列進(jìn)行對(duì)比。選取了5株高水平耐藥菌株抽取質(zhì)粒。質(zhì)粒電泳后轉(zhuǎn)到尼龍膜上,并以地高辛標(biāo)記的mupA基因?yàn)樘结樳M(jìn)行雜交。并將這5株菌的質(zhì)粒電轉(zhuǎn)至受體菌金黃色葡萄球菌RN4220后,篩選出對(duì)莫匹羅星高水平耐藥的RN4220菌株。抽取高水平耐藥的RN4220菌株的質(zhì)粒。質(zhì)粒電泳后轉(zhuǎn)到尼龍膜上,并以地高辛標(biāo)記的mupA基因?yàn)樘结樳M(jìn)行Southern blotting。結(jié)果：共篩選出40株耐藥菌株,31株高水平耐藥株,9株低水平耐藥株。華山醫(yī)院、省立醫(yī)院和溫州附院莫匹羅星耐藥率分別為：9.6%(26/270)、4.9%(9/185)和2.1%(5/241)。溫州社區(qū)100株細(xì)菌中沒(méi)有對(duì)莫匹羅星耐藥菌株。華山醫(yī)院2004、2007和2010年莫匹羅星耐藥率分別為：12.8%(12/94),9.6%(8/83),6.5%(6/93),呈下降趨勢(shì)。與微量標(biāo)準(zhǔn)肉湯稀釋法相比,用PCR方法擴(kuò)增mupA基因來(lái)檢測(cè)金黃色葡萄球菌是否對(duì)莫匹羅星高水平耐藥,靈敏度可達(dá)100%,特異度是98.7%。與低水平耐藥密切相關(guān)的是ileS基因第1762位堿基G到T的突變(G1762T)。高水平耐藥株質(zhì)粒轉(zhuǎn)膜后的Southern blotting結(jié)果顯示mupA基因的雜交部位在54kb左右的質(zhì)粒上。高水平耐藥菌株RN4220質(zhì)粒轉(zhuǎn)膜后的Southern blotting結(jié)果顯示mupA基因的雜交部位在54kb左右的質(zhì)粒上。結(jié)論：華山醫(yī)院中金黃色葡萄球菌對(duì)莫匹羅星的耐藥率高于山東省立醫(yī)院和溫州第一附院,并呈下降趨勢(shì)。溫州社區(qū)未檢測(cè)到對(duì)莫匹羅星耐藥金黃色葡萄球菌。與低水平耐藥密切相關(guān)的是ileS基因(G1762T)的變化。金黃色葡萄球菌的高水平耐藥與獲得含有mupA基因的54kb左右的質(zhì)粒相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：金黃色葡萄球菌 克隆分型 耐藥 毒力基因 金黃色葡萄球菌 莫匹羅星 耐藥 mupA
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R378
【目錄】：

• 英文縮略詞表4-5
• 摘要5-8
• Abstract8-12
• 前言12-15
• 第一部分：金黃色葡萄球菌的分子特征分析15-35
• 引言15
• 材料與方法15-22
• 結(jié)果22-31
• 討論31-35
• 第二部分：金黃色葡萄球菌對(duì)莫匹羅星的耐藥表型特征和耐藥機(jī)制研究35-52
• 引言35-36
• 材料與方法36-43
• 結(jié)果43-49
• 討論49-52
• 總結(jié)52-53
• 1、05到，
  
  本文編號(hào)：639326
  suoshi