本文關(guān)鍵詞：冰凍切片法觀察不脫鈣骨組織的熒光分布

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【摘要】：目的介紹一種不脫鈣骨組織的冰凍切片法,通過觀察骨和軟骨內(nèi)的熒光分布,探討該方法的可行性。方法取健康成年雄性綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因SD大鼠膝關(guān)節(jié),經(jīng)包埋劑包埋,置于冰凍切片機中,將表面涂有合成橡膠的薄膜黏附于包埋塊表面,行膝關(guān)節(jié)組織切片。熒光顯微鏡及光鏡下觀察切片組織內(nèi)熒光表達(dá)及結(jié)構(gòu);并行Ⅰ、Ⅱ型膠原免疫熒光染色和HE、甲苯胺藍(lán)、茜素紅染色,觀察軟骨及骨的結(jié)構(gòu)及熒光分布特征。結(jié)果制備的大鼠膝關(guān)節(jié)冰凍切片厚度均為6μm,大體觀察示關(guān)節(jié)各結(jié)構(gòu)均完整切割,光鏡下能清晰分辨切片軟骨各層細(xì)胞形態(tài)以及軟骨下骨、骨小梁排列走行。熒光顯微鏡下觀察,可見關(guān)節(jié)周圍軟組織、軟骨及骨組織呈綠色熒光,Ⅰ型膠原在骨組織表達(dá),Ⅱ型膠原在軟骨組織表達(dá)。HE染色及甲苯胺藍(lán)染色能清晰分辨軟骨層形態(tài)結(jié)構(gòu)。茜素紅染色示軟骨下骨板、半月板內(nèi)部組織結(jié)構(gòu)完整,而且脛骨近端的皮質(zhì)骨連續(xù)性存在。結(jié)論采用冰凍切片法制備不脫鈣骨組織切片,可直接觀察骨、軟骨組織內(nèi)熒光物質(zhì)的分布,縮短骨組織切片的制備周期。
【作者單位】： 解放軍總醫(yī)院骨科研究所;南開大學(xué)醫(yī)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 冰凍切片 不脫鈣骨組織 免疫熒光 大鼠
【基金】：國家重點基礎(chǔ)研究發(fā)展計劃(973)資助項目(2014CB-542201) 北京市科技專項資助項目(Z141107004414044)~~
【分類號】：R361.2
【正文快照】： 1 Institute of Orthopedics,General Hospital of Chinese PLA,Beijing,100853,P.R.China;2 Medical College of Nankai University.隨著骨和軟骨組織工程研究的深入,熒光標(biāo)記的藥物、修復(fù)材料和細(xì)胞應(yīng)用越來越廣泛[1]。通過熒光標(biāo)記方法觀察種子細(xì)胞、支架材料和藥物的轉(zhuǎn)歸

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 章克萍;周瑩;龍飛;;不同組織冰凍切片的制作方法[J];江西醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2006年04期

2 王勇平;李曉琴;張輝;蔣W，

本文編號：639290