本文關(guān)鍵詞：大鼠肝再生過程中caspase-8的表達與時間相關(guān)性的研究

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【摘要】：目的:觀察大鼠肝再生過程中caspase-8表達的動態(tài)變化，探討大鼠肝再生過程中細胞凋亡的調(diào)控機制。 方法:健康雄性SD大鼠75只，隨機分為三組，手術(shù)組35只，10%水合氯醛麻醉后行70%肝大部切除；假手術(shù)組35只，麻醉后開腹，只翻動肝臟，不做肝切除，正常對照組5只，不做任何處理。手術(shù)組和假手術(shù)組各自分為七個亞組，即手術(shù)完成后分別飼養(yǎng)大鼠3h,6h,24h,3d,7d,11d,14d后處死，切取殘肝，稱重；正常組直接切取肝臟，稱重后取材進行組織學處理，石蠟包埋，切片，并做H-E染色和免疫組織化學染色，觀察不同時間點肝細胞形態(tài)學變化，檢測不同時間點caspase-8的表達及分布。 結(jié)果:①肝再生度：大鼠手術(shù)后3h肝再生度為0.15±0.02，6h后肝再生度為0.17±0.01，24h后肝再生度為0.21±0.02，3d時肝再生度為0.52±0.04，7d時肝再生度為0.82±0.04，11d時肝再生度為0.83±0.03，14d時肝再生度為0.85±0.02，基本呈現(xiàn)24h時開始上升，7d達高峰并維持在峰值的趨勢。 ②肝再生指數(shù)：大鼠手術(shù)后3h肝再生指數(shù)為0.99±0.10，6h后肝再生指數(shù)為1.09±0.16，24h后肝再生指數(shù)為1.12±0.03，3d時肝再生指數(shù)為2.15±0.08，7d時肝再生指數(shù)為3.30±0.07，11d時肝再生指數(shù)為3.33±0.17，14d時肝再生指數(shù)為3.35±0.09，呈現(xiàn)24h時開始上升，3d時升高明顯，7d達高峰并維持在峰值的趨勢。 ③H-E染色：正常組：肝小葉結(jié)構(gòu)完整，中央靜脈周圍有放射狀排列的肝細胞索，肝血竇明顯，肝細胞體積正常，核圓居中，可見核仁、胞質(zhì)豐富，，匯管區(qū)清晰可辨,無明顯炎性細胞浸潤。假手術(shù)組：肝小葉結(jié)構(gòu)完整，中央靜脈周圍有放射狀排列的肝細胞索，肝血竇明顯，肝細胞體積正常，核圓居中，可見核仁、胞質(zhì)豐富，匯管區(qū)清晰可辨,未見明顯炎細胞浸潤，未見明顯有絲分裂，與正常組相比無明顯變化。正常組和假手術(shù)組很少見到肝細胞核分裂相。手術(shù)組：肝大部切除3h后可見肝細胞水腫變性較輕，炎性反應(yīng)不明顯，肝血竇稍增寬。術(shù)后6h腫脹較前明顯，肝血竇進一步增寬，血竇內(nèi)有較多紅細胞，肝索結(jié)構(gòu)稍混亂，肝小葉結(jié)構(gòu)尚完整。術(shù)后24h時，可見細胞腫脹較前減輕，血竇間隙較前更進一步增大，其內(nèi)有較多紅細胞，并見炎性細胞浸潤，雙核肝細胞增多。3d后肝細胞明顯增大，肝細胞及胞核大小不一，胞質(zhì)內(nèi)可見空泡，匯管區(qū)周圍可見雙核肝細胞及有絲分裂。7d后可見部分細胞出現(xiàn)破裂，血竇間隙模糊，并見炎性細胞浸潤，雙核肝細胞增多，空泡樣變性較前進一步增多。11d后大部分肝板排列較規(guī)整，肝細胞及核大小程度不一，雙核和有絲分裂的肝細胞數(shù)量減少。14d后肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝血竇明顯，大部分肝板排列較規(guī)整，肝細胞及核大小不一，雙核和有絲分裂肝細胞減少。正常對照組和假手術(shù)組有絲分裂現(xiàn)象少見，肝70%切除術(shù)后有絲分裂肝細胞最多見于3d，術(shù)后11d，14d時已少見。 ④免疫組化染色：caspase-8蛋白陽性產(chǎn)物呈棕黃色，主要分布于細胞核,正常對照組陽性細胞百分比為3.51±2.38%，假手術(shù)組3h陽性細胞百分比為10.34±5.32%,6h陽性細胞百分比為12.53±4.56%，24h陽性細胞百分比為14.23±4.13%，3d陽性細胞百分比為6.12±4.67%,7d陽性細胞百分比為4.65±3.75%,11d陽性細胞百分比為3.53±4.26%，14d陽性細胞百分比為3.46±5.37%，其中3h,6h,24h,3d,7d組與正常組相比，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）。11d,14d組與正常組相比，差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。手術(shù)組3h陽性細胞百分比為26.74±4.59%，6h陽性細胞百分比為30.58±3.58%，24h陽性細胞百分比為32.16±4.36%，3d陽性細胞百分比為53.19±5.43%，7d陽性細胞百分比為70.36±7.69%，11d陽性細胞百分比為50.37±4.38%，14d陽性細胞百分比為45.25±7.67%。手術(shù)組7個亞組與正常組相比，差異均有統(tǒng)計學意義（P0.05）。手術(shù)組7個亞組與假手術(shù)組相比，差異均有統(tǒng)計學意義（P0.05）。手術(shù)組caspase-8表達趨勢為術(shù)后3h陽性細胞表達率開始上升，到7d達到峰值后開始下降，但14d時仍明顯高于假手術(shù)組和正常對照組。假手術(shù)組caspase-8表達趨勢呈術(shù)后3h表達開始上升，到24h時達峰值并開始下降，11d時恢復(fù)到正常水平。 結(jié)論：caspase-8是一種細胞凋亡酶，肝大部切除后肝再生中，存在著細胞凋亡的分子調(diào)控機制，早期細胞凋亡活性的升高可能為手術(shù)應(yīng)激反應(yīng)所致，后期持續(xù)增高的細胞凋亡則可能與肝再生終止和肝組織結(jié)構(gòu)重塑的調(diào)控有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：肝大部切除 肝再生 caspase-8 細胞凋亡
【學位授予單位】：大理學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R363
【目錄】：

• 目錄3-4
• 縮略詞表4-5
• 中文摘要5-8
• Abstract8-12
• 前言12-14
• 材料與方法14-18
• 結(jié)果18-25
• 討論25-29
• 結(jié)論29-30
• 參考文獻30-33
• 附錄33
• 文獻綜述33-39
• 參考文獻37-39
• 致謝39

【共引文獻】

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本文編號：630120