本文關(guān)鍵詞：川崎病動物模型的建立以及其血漿N末端腦利鈉肽前體水平的變化

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【摘要】：目的 川崎病(Kawasaki disease，KD)是兒科一種常見的自身免疫性疾病，可引起全身性血管炎，并好發(fā)于冠狀動脈，從而造成嚴(yán)重的并發(fā)癥冠狀動脈損害（coronary arterial lesions,CAL），是構(gòu)成兒童后天性心臟病的主要病因之一。目前，臨床上對于KD主要根據(jù)臨床特點(diǎn)，和輔以超聲心動圖檢查予以診斷，缺乏便于早期診斷的特異性生化指標(biāo)，本課題通過建立動物疾病模型，對其血液相關(guān)生化指標(biāo)進(jìn)行檢測，以期尋找到一種可幫助疾病早期診斷的血液指標(biāo)。同時(shí)，KD的發(fā)病機(jī)制至今也尚不明確，疾病動物模型的建立也可為進(jìn)一步探討KD的發(fā)病機(jī)制提供研究平臺。 方法 第一階段：本課題采用乳酸桿菌細(xì)胞壁提取物（1actobacillus casei cellwall extract,LCWE）作為免疫誘導(dǎo)劑，通過MRS肉湯培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)獲取大量培養(yǎng)物，，并經(jīng)超聲破碎、SDS細(xì)胞裂解，以及RNase、DNaseI、胰蛋白酶等處理萃取所需LCWE，最終以細(xì)胞壁中肽聚糖的含量作為LCWE的濃度，利用多糖在濃硫酸的作用下水解成單糖，并迅速脫水生成糖醛衍生物，然后與苯酚生成橙黃色化合物(苯酚-硫酸法)，在紫外可見分光光度計(jì)波長490nm下檢測其吸光度，并結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)物葡萄糖胺所繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得到LCWE的樣品濃度，然后配制成濃度為1mg/ml的溶液備用。 第二階段：將80只BALB/C小鼠（4-6周齡）隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對照組，每組各40只，對實(shí)驗(yàn)組小鼠采取腹腔注射LCWE（1mg/ml）0.5ml，連續(xù)3天，而對照組小鼠則予以生理鹽水NS作同樣處理。然后于第1、3、5、10、28天對兩組小鼠分批進(jìn)行解剖，每次各組解剖8只，摘取心臟、主動脈等血管組織，對組織標(biāo)本進(jìn)行HE染色，觀察其病理改變。另外，通過摘眼球法采血留取血液標(biāo)本0.5-1ml，經(jīng)離心后，采用生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA法）測定小鼠血漿N末端腦鈉肽前體（N-terminal pro-brain natriuretic peptide, NT-proBNP）的含量，并對所獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，比較兩組小鼠NT-proBNP濃度的變化是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P㩳0.05）。 結(jié)果 1、動物組織標(biāo)本病理變化情況：經(jīng)腹腔注射LCWE后，實(shí)驗(yàn)組小鼠心臟冠狀動脈及主動脈等血管周圍發(fā)生炎性改變的占77.5%（31/40），而對照組小鼠則未有發(fā)生類似血管炎癥改變現(xiàn)象。 2、實(shí)驗(yàn)組小鼠心臟及主動脈標(biāo)本經(jīng)HE染色后光鏡下檢查顯示起初僅見有少許中性粒細(xì)胞沿著血管內(nèi)皮聚集，后逐漸增多累及血管壁周圍（第1、3天），繼之出現(xiàn)大量中性粒細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞以及成纖維細(xì)胞的浸潤，同時(shí)伴有血管內(nèi)膜增厚（第5天），第10天炎癥反應(yīng)累及血管全層，可見動脈內(nèi)膜、中膜以及外膜斷裂，并伴有大量巨噬細(xì)胞浸潤和成纖維細(xì)胞增生，至28天時(shí)，血管周圍炎性細(xì)胞明顯減少，出現(xiàn)明顯纖維化，導(dǎo)致動脈血管增厚狹窄。 3、小鼠血漿NT-proBNP的含量變化：兩組BALB/C小鼠的血液經(jīng)離心后，采用ELISA法檢測其血漿NT-proBNP濃度，并對兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組小鼠NT-proBNP濃度明顯升高，與對照組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P㩳0.05）。同時(shí)，結(jié)合所得的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組小鼠血漿NT-proBNP濃度在疾病發(fā)展的急性期（第1~10天）有逐漸升高趨勢，至第28天實(shí)驗(yàn)組小鼠血漿NT-proBNP濃度水平相對于初期又出現(xiàn)明顯下降，而對照組小鼠血漿NT-proBNP濃度水平則未見有明顯波動變化。 結(jié)論 1.腹腔注射LCWE能夠誘導(dǎo)BALB/C小鼠發(fā)生血管炎癥改變，模仿KD所致的冠狀動脈炎癥損害，是一種比較可靠的疾病動物模型，可用于進(jìn)一步的科研實(shí)驗(yàn)。 2.采用ELISA法檢測KD小鼠動物模型的血漿NT-proBNP濃度，通過t檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其濃度相對于對照組有明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P㩳0.05），提示血漿NT-proBNP濃度變化可能是KD血液中一種特異性變化的生化指標(biāo)，有望成為臨床上幫助KD早期診斷的指標(biāo)之一。
【關(guān)鍵詞】：川崎病 動物模型 N末端腦鈉肽前體 診斷
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R-332;R725.4
【目錄】：

• 目錄4-5
• 中英文縮略詞表5-6
• 中文摘要6-9
• Abstract9-12
• 前言12-15
• 材料與方法15-22
• 結(jié)果22-26
• 討論26-29
• 結(jié)論29
• 不足和展望29-30
• 參考文獻(xiàn)30-33
• 附錄33-34
• 致謝34-35
• 綜述35-40
• 參考文獻(xiàn)39-40

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：614726