本文關(guān)鍵詞：粉塵螨過(guò)敏原脂肪酶的表達(dá)、純化及生物信息學(xué)分析

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【摘要】：為克隆原核表達(dá)并純化出粉塵螨過(guò)敏原脂肪酶蛋白,鑒定其免疫學(xué)活性,并分析其分子特征.通過(guò)重組合成粉塵螨新過(guò)敏原脂肪酶基因,與p ET-28a載體連接后轉(zhuǎn)化大腸埃希菌E.coli Top10,用異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)表達(dá)重組新過(guò)敏原脂肪酶蛋白;經(jīng)鎳柱親和層析純化出粉塵螨重組脂肪酶蛋白,用Western Blot、ELISA方法檢測(cè)其免疫原性.用生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)其理化性質(zhì)、二級(jí)結(jié)構(gòu),并構(gòu)建分子進(jìn)化樹(shù).成功表達(dá)純化出高純度的粉塵螨重組脂肪酶蛋白,十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)結(jié)果顯示表達(dá)重組產(chǎn)物分子質(zhì)量約為40 k Da,與理論值一致,純化后的表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)Western blot印跡檢測(cè)有明顯條帶顯示.信息學(xué)分析顯示蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)由α螺旋(16.38%)、延伸主鏈(18.93%)、無(wú)規(guī)則卷曲(64.69%)組成.成功原核表達(dá)出粉塵螨過(guò)敏原脂肪酶蛋白,并純化獲得較高純度及較強(qiáng)免疫學(xué)活性的重組脂肪酶蛋白,為塵螨過(guò)敏性疾病的特異性診斷和免疫治療奠定理論基礎(chǔ).
【作者單位】： 深圳大學(xué)過(guò)敏反應(yīng)與免疫學(xué)研究所;南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： 粉塵螨 過(guò)敏原 重組脂肪酶 生物信息學(xué)分析
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(31328014,31400786) 廣東省高等學(xué)校國(guó)際暨港澳臺(tái)科技合作創(chuàng)新平臺(tái)項(xiàng)目(2012gjhz0009) 深圳市科技計(jì)劃國(guó)際科技合作項(xiàng)目(GJHZ20130408174112021) 深圳市科技計(jì)劃基礎(chǔ)研究項(xiàng)目(JCYJ20130329110735981,JCYJ20120613173233810) 深圳市南山區(qū)研發(fā)項(xiàng)目(KC2012JSYB0003A)資助
【分類(lèi)號(hào)】：R392
【正文快照】： 0引言近年來(lái),過(guò)敏性疾病諸如過(guò)敏性鼻炎、哮喘等發(fā)病率逐年升高,成為全球關(guān)注的公眾衛(wèi)生學(xué)問(wèn)題.其中塵螨是室內(nèi)主要的過(guò)敏原,過(guò)敏體質(zhì)者吸人其排泄物與死亡殘?bào)w后可誘發(fā)I型變態(tài)反應(yīng)[1-2],塵螨過(guò)敏原是過(guò)敏性哮喘的主要誘因,雖然各個(gè)國(guó)家之間有地域差異,但是在北美、南美、歐洲

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