本文關(guān)鍵詞：新型惡性瘧原蟲（Plasmodium falciparum）基因表達(dá)平臺(tái)的建立

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【摘要】：瘧疾是世界上最嚴(yán)重的感染性疾病之一,一直以來都威脅著人類健康,其中惡性瘧原蟲所導(dǎo)致的危害最為嚴(yán)重。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展,對(duì)于瘧原蟲的相關(guān)研究也日益深入,尤其瘧原蟲基因及其編碼蛋白功能的揭示為瘧疾防治提供了新的思路。而通常用于研究的基因外源表達(dá)體系均因?yàn)閻盒辕懺x基因組中高AT含量產(chǎn)生的密碼子偏愛性、包涵體形成等原因,使惡性瘧基因體外表達(dá)困難重重。 2011年,荷蘭萊頓大學(xué)Shahid Khan教授課題組成功建立了GIMO體系,為惡性瘧原蟲基因的表達(dá)與修飾提供了一個(gè)嶄新平臺(tái)。本實(shí)驗(yàn)中所用目的基因pfmif與pfmag-1是由本實(shí)驗(yàn)室保存的惡性瘧原蟲基因,前期已對(duì)其做到過深入研究,證明二者均在惡性瘧原蟲引起的免疫反應(yīng)及其與宿主間相互作用中發(fā)揮重要作用,但對(duì)于全長(zhǎng)pfmag-1基因的表達(dá)卻一直沒有成功,因此,本研究試圖以較好表達(dá)的pfmif基因作為技術(shù)對(duì)照,通過表達(dá)pfmif和pfmag-1全長(zhǎng)基因在本實(shí)驗(yàn)室建立GIMO技術(shù)平臺(tái)系統(tǒng),為深入研究瘧原蟲的生物學(xué)特性奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)中首先通過酶切插入法重新構(gòu)建質(zhì)粒mif-1628、mag-1-1628,其次通過優(yōu)化伯氏瘧原蟲體外培養(yǎng)方法,提高了成熟裂殖體含量的基礎(chǔ)上避免了游離裂殖子的流失,并縮短了實(shí)驗(yàn)周期。同時(shí),改進(jìn)了藥物篩選方法,將GIMo體系中腹腔注射的用藥方式(注射劑量為0.4g/kg·day)轉(zhuǎn)變?yōu)轱嬘盟盟?1.5mg/mL),相對(duì)于原方法成功抑制了野生型伯氏瘧原蟲的生長(zhǎng),更有利于目的整合蟲株的篩選。 綜上所述,本實(shí)驗(yàn)中成功構(gòu)建了包含外源基因的目的質(zhì)粒,并優(yōu)化了伯氏瘧原蟲體外培養(yǎng)與藥物篩選方法,為今后的實(shí)驗(yàn)奠定了良好基礎(chǔ),此外,后期的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)仍在繼續(xù)。
【關(guān)鍵詞】：GIMO 質(zhì)粒構(gòu)建 體外培養(yǎng) 藥物篩選 轉(zhuǎn)染
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R382.31
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-6
• 前言6-9
• 實(shí)驗(yàn)材料9-17
• 一、實(shí)驗(yàn)試劑9-13
• 二、主要儀器設(shè)備13-14
• 三、主要分析軟件14
• 四、主要溶液配制14-17
• 實(shí)驗(yàn)方法17-35
• 一、常用的分子生物學(xué)方法17-24
• 二、瘧原蟲培養(yǎng)24-28
• 三、轉(zhuǎn)染28-34
• 實(shí)驗(yàn)流程圖34-35
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果35-61
• 第一部分 伯氏瘧原蟲Pb1596以及目標(biāo)質(zhì)粒pL1628的鑒定35-39
• 第二部分 外源基因的鑒定及載體構(gòu)建39-49
• 第三部分 目的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染伯氏瘧原蟲Pb1596條件的初步探究49-57
• 第四部分 體外培養(yǎng)瘧原蟲方法的優(yōu)化57-60
• 第五部分 藥物篩選方法的改進(jìn)60-61
• 討論61-65
• 小結(jié)65-66
• 參考文獻(xiàn)66-70
• 附錄70-73
• 致謝73-74

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 陳俊;繆軍;劉忠湘;李淑梅;薛采芳;;惡性瘧原蟲頂端膜抗原1基因轉(zhuǎn)染伯氏瘧原蟲模型的建立[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2006年19期

2 羅競(jìng)紅;游自立;;巴斯德畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)在外源基因表達(dá)中的研究進(jìn)展[J];生物技術(shù)通報(bào);2007年03期

3 葉苓,余新炳,徐勁;惡性瘧原蟲熱休克蛋白86(HSP86)基因置換型和插入型打靶載體的構(gòu)建[J];中國(guó)人獸共患病雜志;2000年06期

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本文編號(hào)：585404