發(fā)布時間：2017-07-28 18:22

  本文關(guān)鍵詞：新型惡性瘧原蟲（Plasmodium falciparum）基因表達平臺的建立

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【摘要】：瘧疾是世界上最嚴重的感染性疾病之一,一直以來都威脅著人類健康,其中惡性瘧原蟲所導(dǎo)致的危害最為嚴重。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展,對于瘧原蟲的相關(guān)研究也日益深入,尤其瘧原蟲基因及其編碼蛋白功能的揭示為瘧疾防治提供了新的思路。而通常用于研究的基因外源表達體系均因為惡性瘧原蟲基因組中高AT含量產(chǎn)生的密碼子偏愛性、包涵體形成等原因,使惡性瘧基因體外表達困難重重。 2011年,荷蘭萊頓大學(xué)Shahid Khan教授課題組成功建立了GIMO體系,為惡性瘧原蟲基因的表達與修飾提供了一個嶄新平臺。本實驗中所用目的基因pfmif與pfmag-1是由本實驗室保存的惡性瘧原蟲基因,前期已對其做到過深入研究,證明二者均在惡性瘧原蟲引起的免疫反應(yīng)及其與宿主間相互作用中發(fā)揮重要作用,但對于全長pfmag-1基因的表達卻一直沒有成功,因此,本研究試圖以較好表達的pfmif基因作為技術(shù)對照,通過表達pfmif和pfmag-1全長基因在本實驗室建立GIMO技術(shù)平臺系統(tǒng),為深入研究瘧原蟲的生物學(xué)特性奠定實驗基礎(chǔ)。實驗中首先通過酶切插入法重新構(gòu)建質(zhì)粒mif-1628、mag-1-1628,其次通過優(yōu)化伯氏瘧原蟲體外培養(yǎng)方法,提高了成熟裂殖體含量的基礎(chǔ)上避免了游離裂殖子的流失,并縮短了實驗周期。同時,改進了藥物篩選方法,將GIMo體系中腹腔注射的用藥方式(注射劑量為0.4g/kg·day)轉(zhuǎn)變?yōu)轱嬘盟盟?1.5mg/mL),相對于原方法成功抑制了野生型伯氏瘧原蟲的生長,更有利于目的整合蟲株的篩選。 綜上所述,本實驗中成功構(gòu)建了包含外源基因的目的質(zhì)粒,并優(yōu)化了伯氏瘧原蟲體外培養(yǎng)與藥物篩選方法,為今后的實驗奠定了良好基礎(chǔ),此外,后期的轉(zhuǎn)染實驗仍在繼續(xù)。
【關(guān)鍵詞】：GIMO 質(zhì)粒構(gòu)建 體外培養(yǎng) 藥物篩選 轉(zhuǎn)染
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R382.31
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-6
• 前言6-9
• 實驗材料9-17
• 一、實驗試劑9-13
• 二、主要儀器設(shè)備13-14
• 三、主要分析軟件14
• 四、主要溶液配制14-17
• 實驗方法17-35
• 一、常用的分子生物學(xué)方法17-24
• 二、瘧原蟲培養(yǎng)24-28
• 三、轉(zhuǎn)染28-34
• 實驗流程圖34-35
• 實驗結(jié)果35-61
• 第一部分 伯氏瘧原蟲Pb1596以及目標質(zhì)粒pL1628的鑒定35-39
• 第二部分 外源基因的鑒定及載體構(gòu)建39-49
• 第三部分 目的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染伯氏瘧原蟲Pb1596條件的初步探究49-57
• 第四部分 體外培養(yǎng)瘧原蟲方法的優(yōu)化57-60
• 第五部分 藥物篩選方法的改進60-61
• 討論61-65
• 小結(jié)65-66
• 參考文獻66-70
• 附錄70-73
• 致謝73-74

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 陳俊;繆軍;劉忠湘;李淑梅;薛采芳;;惡性瘧原蟲頂端膜抗原1基因轉(zhuǎn)染伯氏瘧原蟲模型的建立[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2006年19期

2 羅競紅;游自立;;巴斯德畢赤酵母表達系統(tǒng)在外源基因表達中的研究進展[J];生物技術(shù)通報;2007年03期

3 葉苓,余新炳,徐勁;惡性瘧原蟲熱休克蛋白86(HSP86)基因置換型和插入型打靶載體的構(gòu)建[J];中國人獸共患病雜志;2000年06期

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本文編號：585404