本文關鍵詞：HPV16型E7抗原CTL表位模擬肽及初步免疫學效應研究

  更多相關文章： 人乳頭瘤病毒 表位 MHC I分子 細胞毒性T淋巴細胞 分子修飾 計算機輔助藥物設計

【摘要】：方法： 1根據(jù)野生表位肽RAHYNIVTF的結構和初步血漿實驗結果，確定改造部位，將得到的模擬表位肽進行分子動力學模擬和結合自由能的計算。 2采用標準Fmoc方案固相合成技術對表位模擬肽進行合成、純化和分子量鑒定。 3運用T2細胞對野生型表位肽和表位模擬肽與HLA-A2分子親和力進行分析。 4采用標準的乳酸脫氫酶方法檢測人的毒性T淋巴細胞對于T2靶細胞的免疫殺傷效應。 結果： 1根據(jù)表位肽的結構和初步實驗結果，分別在將1位和4位點用D型氨基酸單突變和雙突變替換，得到①（d）RAHYNIVTF，②RAHY(d)NIVTF,③（d）RAH（d）YNIVTF3條表位模擬肽。 2分子動力學結果表明：野生型表位肽和表位模擬肽與MHC-I分子的結合比較穩(wěn)定，，與各個口袋中氨基酸結合也比較合理。 3對合成的表位模擬肽純度和分子量進行分析，證明純度均已達到95%以上，分子量和目標化合物相吻合，可為后續(xù)實驗所用。 4親和力實驗發(fā)現(xiàn)野生型表位肽為中等親和力，改造后的①（d）RAHYNIVTF FI值最高，與HLA-A2親和力最強，而另兩條D型改造的模擬肽則完全沒有親和力。 5運用乳酸脫氫酶方法對野生型表位肽和3條表位模擬肽刺激的CTL進行殺傷效果測試，野生型表位肽為57.87%，①表位模擬肽為33.46%，而其他兩條沒有明顯的殺傷效果。 結論 1采用血漿中穩(wěn)定性實驗，首次分析了野生型表位肽的體外半衰期。 2用D型氨酸替換的模擬表位肽可以有效提高在血漿中酶的耐受性。 3體外細胞實驗中證明了①（d）RAHYNIVTF可以誘導CTL產(chǎn)生殺傷作用，但沒有野生型表位肽效果好。 從以上結論得出，雖然改造的①（d）RAHYNIVTF免疫原性降低，但體外半衰期明顯延長，且親和力也增強，如果通過佐劑或者其他輔助的修飾，以提高其免疫原性，將有可能得到穩(wěn)定，親和力高，免疫效果強的表位模擬肽，為治療性CTL疫苗的設計進一步奠定基礎。
【關鍵詞】：人乳頭瘤病毒 表位 MHC I分子 細胞毒性T淋巴細胞 分子修飾 計算機輔助藥物設計
【學位授予單位】：重慶理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 目錄8-11
• 英文縮寫一覽表11-13
• 1 緒論13-23
• 1.1 HPV 分型13
• 1.2 HPV 生物學結構13-14
• 1.3 HPV16 的致癌機制14-15
• 1.4 HPV 反復感染的原因15-16
• 1.5 HPV16 E7 的結構與功能16
• 1.6 HPV 疫苗及研究現(xiàn)狀16-20
• 1.6.1 DNA 疫苗18
• 1.6.2 活的載體疫苗18-19
• 1.6.3 多肽類疫苗19-20
• 1.6.5 蛋白質疫苗20
• 1.7 研究目的和意義20
• 1.8 主要研究方法和主要技術路線20-23
• 2 HPV16 型 E7 抗原 CTL 表位模擬肽的設計與合成23-31
• 2.1 引言23-25
• 2.2 實驗材料25
• 2.2.1 主要實驗材料25
• 2.2.2. 主要實驗試劑25
• 2.2.3. 主要實驗儀器25
• 2.3 實驗方法25-26
• 2.3.1 多肽的合成與鑒定25-26
• 2.3.2 多肽的凍干和儲存26
• 2.3.3 野生型肽在人血漿中的穩(wěn)定性26
• 2.4 結果26-29
• 2.4.1 野生型表位肽的純化和質譜鑒定結果26-27
• 2.4.2 LC-MS 檢測酶解結果27-29
• 2.5 討論29-31
• 3 分子動力學模擬和表位模擬肽的合成31-47
• 3.1 引言31-35
• 3.2 動力學實驗35-41
• 3.2.1 實驗材料35
• 3.2.2 實驗方法35
• 3.2.3 結果35-41
• 3.3 模擬表位肽的的合成、純化、鑒定41-44
• 3.4 討論44-47
• 4 HPV16E7 表位肽和表位模擬肽的血漿中穩(wěn)定性實驗47-53
• 4.1 引言47-48
• 4.2 實驗材料48-49
• 4.2.1 主要實驗材料48
• 4.2.2 主要實驗試劑48
• 4.2.3 主要實驗儀器48-49
• 4.3 實驗方法49
• 4.4 結果49-50
• 4.5 討論50-53
• 5 野生型肽與表位模擬肽與 HLA-A2 分子的親和力53-61
• 5.1 引言53-54
• 5.2 實驗材料54-55
• 5.2.1 主要實驗材料54
• 5.2.2 主要實驗試劑及配制54
• 5.2.3 主要實驗儀器54-55
• 5.3 實驗方法55-56
• 5.3.1 細胞的復蘇和培養(yǎng)55
• 5.3.2 細胞的凍存55
• 5.3.3 T2 細胞-抗原肽親和力實驗55-56
• 5.4 結果56-58
• 5.5 討論58-61
• 6 HPV16 型 E7 抗原 CTL 表位模擬肽體外殺傷效應61-67
• 6.1 實驗材料61-62
• 6.1.1 主要實驗材料61
• 6.1.2 主要實驗試劑61
• 6.1.3 主要實驗儀器61-62
• 6.2 實驗方法62-64
• 6.2.1 效應細胞的制備62
• 6.2.2 靶細胞 T2 的制備62
• 6.2.3 CTL 細胞的殺傷力測定（乳酸脫氫酶釋放法）62-64
• 6.3 結果64-65
• 6.4 討論65-67
• 全文總結67-69
• 參考文獻69-75
• 致謝75-76
• 個人簡歷、在校期間發(fā)表的學術論文及取得的研究成果76

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 張茂祥,張富春;人乳頭瘤病毒16型E7疫苗的研究進展[J];地方病通報;2003年02期

2 江昱;;HPV病毒及其疫苗的研究進展[J];四川文理學院學報;2010年05期

3 翟紅梅;曹長春;韓永紅;劉家秀;;從頭藥物設計技術[J];北方藥學;2013年02期

4 徐云升,郝飛,吳玉章,林治華,賈正才,郝進;HPV16E7抗原HLA-A2限制性CTL表位預測及其合成[J];免疫學雜志;2003年02期

5 李正夫;王希誠;郭權;;CUDA下受體評分網(wǎng)格生成并行算法[J];計算機應用研究;2013年03期

6 李秀娟;;宮頸癌流行病學及高危因素研究進展[J];實用醫(yī)技雜志;2006年19期

7 鐘偉明;黃善忠;韋干芬;;HPV病毒與宮頸癌的研究進展[J];中國社區(qū)醫(yī)師(醫(yī)學專業(yè));2011年17期

本文編號：576784