發(fā)布時(shí)間：2017-07-20 18:23

  本文關(guān)鍵詞：宮內(nèi)缺氧對(duì)成年子代大鼠肝纖維化易感性的影響

  更多相關(guān)文章： 宮內(nèi)缺氧 四氯化碳 肝纖維化 大鼠 模型

【摘要】：目的：1．探討宮內(nèi)缺氧對(duì)胎鼠及子代大鼠（1、3、6月）肝臟生長發(fā)育的影響。2．研究CCl4對(duì)宮內(nèi)缺氧子代大鼠（6月）肝纖維化易感性的影響。 方法：將大鼠從妊娠第4天至第20天（gestation day，GD4-20）放入缺氧環(huán)境飼養(yǎng)（O2濃度10±0.5%），建立大鼠宮內(nèi)缺氧模型。實(shí)驗(yàn)分為兩組：常氧對(duì)照組（簡稱對(duì)照組），宮內(nèi)缺氧組（簡稱缺氧組）。檢測(cè)兩組中胎鼠（GD20）血?dú)饧把弘x子指標(biāo)；稱量兩組的胎鼠及子代大鼠（1、3、6月）的體重、肝臟重量，計(jì)算其肝比重；檢測(cè)兩組樣品的血清生化指標(biāo)，包括血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanineaminotransferase，ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase，AST）的變化；分別對(duì)兩組的肝臟進(jìn)行HE染色后光鏡下觀察肝組織病理改變；Western-blot印跡法檢測(cè)肝組織缺氧誘導(dǎo)因子-1α（hypoxia-inducible factor-1, HIF-1α）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和白細(xì)胞介素-6（IL-6）蛋白的表達(dá)。 取6月齡雄性Sprague-Dawley（SD）子代大鼠隨機(jī)分4組：正常子代組（n=15），缺氧子代組（n=15），正常子代+CCl4組（n=50），缺氧子代+CCl4組（n=50）。正常子代+CCl4組和缺氧子代+CCl4組均給予40%CCl4植物油混懸液腹腔注射，1ml/kg，3次/周，共計(jì)8周。正常子代組和缺氧子代組均給予同劑量的生理鹽水腹腔注射，處理方法同上。分別于給藥1、2、3、4、6、8周末隨機(jī)取6只大鼠，同一時(shí)間點(diǎn)從正常子代組和缺氧子代組各取2只處死，稱量體重、肝臟重量；分別對(duì)上述樣本肝臟行HE染色和Masson膠原纖維染色，HE染色光鏡觀察肝組織改變，Masson膠原纖維染色光鏡觀察肝纖維化過程；Western-blot印跡法檢測(cè)肝組織TGF-β1蛋白的表達(dá)。 結(jié)果： 1．大鼠宮內(nèi)缺氧模型建立：與對(duì)照組相比，宮內(nèi)缺氧降低胎兒血液中pO2和SO2％水平；而胎鼠血液中的pH、pCO2、Hb等指標(biāo)沒有明顯的影響。 2．與對(duì)照組相比，缺氧組胎鼠及1、3月齡子代大鼠血漿中ALT、AST有顯著性差異，而6月齡子代大鼠無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與對(duì)照組相比，缺氧組胎鼠的體重、肝重、肝比重有顯著性差異；而1、3、6月齡子代大鼠無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3．肝組織HE染色：與對(duì)照組相比，，缺氧組胎鼠肝組織結(jié)構(gòu)松散，肝細(xì)胞索排列紊亂，細(xì)胞質(zhì)疏松化，細(xì)胞核相對(duì)較小。出生后1、3月齡缺氧組大鼠肝細(xì)胞索仍排列紊亂，細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)大量脂肪變性的空泡。6月齡時(shí)，肝細(xì)胞索排列有序，在中央靜脈周圍有少量肝細(xì)胞胞質(zhì)出現(xiàn)脂肪變性的空泡。 4．肝組織HIF-1α、 IL-6及TNF-α蛋白：與對(duì)照組相比，缺氧組胎鼠及1、3月齡子代大鼠肝組織中HIF-1α、IL-6和TNF-α的表達(dá)量明顯增加。6月齡子代大鼠時(shí)，三種蛋白的表達(dá)量有增加，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 5．給予二次打擊后子代大鼠肝比重的變化：正常子代+CCl4組和缺氧子代+CCl4組的肝比重從第4周開始，隨著給藥時(shí)間延長而增加，且缺氧子代+CCl4組在同一個(gè)時(shí)間點(diǎn)的肝比重顯著高于正常子代+CCl4組。 6．肝組織形態(tài)學(xué)變化：正常子代+CCl4組和缺氧子代+CCl4組均隨著給藥時(shí)間的延長，肝組織出現(xiàn)不同程度的損傷。HE染色光鏡下可見，給藥第1周缺氧子代+CCl4組有少量肝細(xì)胞脂肪變性，第4周肝臟形成假小葉。而正常子代+CCl4組直到第8周才出現(xiàn)假小葉。Masson染色光鏡下可見，給藥1周缺氧子代+CCl4組有少量膠原纖維分布在門管區(qū)，直到第4周肝組織中出現(xiàn)大量的膠原纖維，肝細(xì)胞出現(xiàn)大量的脂肪空泡；而正常子代+CCl4組直到第8周才出現(xiàn)上述形態(tài)學(xué)變化。 7．肝組織中TGF-β1蛋白的表達(dá)：隨著給藥時(shí)間的延長，正常子代+CCl4組和缺氧子代+CCl4組肝組織中TGF-β1蛋白的表達(dá)量均增加，在同一個(gè)時(shí)間點(diǎn)缺氧子代+CCl4組TGF-β1的表達(dá)水平顯著高于正常子代+CCl4組。 結(jié)論：宮內(nèi)缺氧導(dǎo)致了胎鼠供血供氧不足，胎鼠宮內(nèi)生長受限，尤其是肝臟發(fā)育受限及肝臟組織結(jié)構(gòu)發(fā)生病理改變。在低氧環(huán)境刺激胎鼠肝臟組織中HIF-1α的表達(dá)水平上調(diào)，激活了HIF-1α蛋白通路，導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)炎癥因子TNF-α和IL-6的分泌增加，啟動(dòng)了子代肝臟發(fā)生炎癥反應(yīng)，這一過程可能促進(jìn)肝星形細(xì)胞的活化。但在出生后6月齡子代大鼠的肝組織中出現(xiàn)部分性追趕生長，肝臟組織趨于正常。在宮內(nèi)缺氧導(dǎo)致的肝臟生長發(fā)育非正常代謝的模式下采用CCl4二次打擊，缺氧子代大鼠（6月齡）形成肝纖維化周期縮短，增加了子代大鼠（6月齡）肝纖維化的易感性。
【關(guān)鍵詞】：宮內(nèi)缺氧 四氯化碳 肝纖維化 大鼠 模型
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R714.2;R321
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 引言10-15
• 第一部分 缺氧對(duì)胎鼠及子代大鼠肝臟生長發(fā)育的影響15-31
• 材料與方法15-20
• 結(jié)果20-22
• 附圖22-27
• 討論27-31
• 第二部分 CCl_4對(duì)宮內(nèi)缺氧子代大鼠（6月）肝纖維化易感性的影響31-45
• 材料與方法31-33
• 結(jié)果33-35
• 附圖35-41
• 討論41-45
• 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-54
• 綜述54-62
• 參考文獻(xiàn)59-62
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文62
• 本課題所獲基金資助62-63
• 縮略詞表63-64
• 致謝64-65

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李莉;楊建一;王文娟;;RAS及其基因多態(tài)性與原發(fā)性高血壓[J];國際遺傳學(xué)雜志;2006年05期

2 陳波,何生;肝纖維化動(dòng)物模型的建立[J];華西醫(yī)學(xué);2005年04期

3 李鴻立,田聆,魏于全,趙霞;刀豆素蛋白A誘導(dǎo)小鼠肝纖維化模型的建立[J];免疫學(xué)雜志;2004年05期

4 周寧,厲有名,張宇,虞朝暉,陳韶華,季峰;大鼠酒精性肝纖維化模型的構(gòu)建[J];東南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2003年02期

5 韓德五;馬學(xué)慧;趙元昌;;肝硬化動(dòng)物模型的研究[J];山西醫(yī)藥雜志;1979年04期

6 李培建,梁保忠,王愛民,王立英,楊躍兵;四氯化碳、人血白蛋白所致大鼠肝纖維化動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)研究[J];實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)與管理;2000年02期

7 文志萍;秦冬梅;曹文江;胡利萍;陳文;;四氯化碳皮下注射制備大鼠肝纖維化模型的建立[J];時(shí)珍國醫(yī)國藥;2011年12期

8 陳剛;李宏波;邱少敏;;CCl_4皮下注射制備大鼠肝纖維化模型的研究[J];現(xiàn)代醫(yī)學(xué);2010年03期

9 呂鵬;四氯化碳腹腔注射制備肝纖維化模型的實(shí)驗(yàn)研究[J];胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志;2003年04期

10 王曉檸,胡義揚(yáng),劉成海,劉平,朱大元;丹酚酸B鹽對(duì)二甲基亞硝胺誘導(dǎo)的肝纖維化大鼠肝臟轉(zhuǎn)化生長因子β1及其受體蛋白表達(dá)的影響[J];中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報(bào);2005年04期

本文編號(hào)：569414