本文關(guān)鍵詞：去乙�；窼irT1參與AIF介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡

  更多相關(guān)文章： AIF SirT1 去乙�；� 蛋白純化 凝膠阻滯

【摘要】：凋亡誘導(dǎo)因子AIF是一類進化上高度保守的黃素蛋白。正常情況下,AIF定位在細(xì)胞的線粒體內(nèi)膜,能催化電子在細(xì)胞色素C與NAD之間的傳遞,發(fā)揮氧化還原酶的功能；當(dāng)細(xì)胞受到凋亡信號的刺激時,AIF被鈣蛋白酶從線粒體內(nèi)膜切下,釋放進入胞質(zhì),通過其N端的核定位序列轉(zhuǎn)位進入細(xì)胞核,在細(xì)胞核中,AIF可直接與DNA結(jié)合,與親環(huán)蛋白A (CypA)及H2AX共同作用引起染色質(zhì)凝集和DNA的大片段化,從而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。AIF引起的細(xì)胞凋亡是caspase非依賴的,用caspase的廣譜抑制劑Z-VAD fmk等均不能抑制AIF引起的細(xì)胞凋亡。目前針對AIF從線粒體釋放入胞質(zhì)并轉(zhuǎn)位進入細(xì)胞核的機制有較清楚的研究,但是對AIF進入細(xì)胞核后如何介導(dǎo)染色質(zhì)凝集及DNA降解的機制研究的還不夠透徹。我們通過質(zhì)譜數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)了AIF的一種新的結(jié)合蛋白一一SirT1。SirT1是一種NAD+依賴的蛋白去乙酰化酶類,能夠與多條信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的蛋白相互作用,通過對生物體內(nèi)的賴氨酸殘基、組蛋白、轉(zhuǎn)錄因子等進行去乙酰化,參與細(xì)胞周期調(diào)控、細(xì)胞衰老凋亡、神經(jīng)保護、胰島素分泌、糖脂類代謝、炎癥氧化應(yīng)激反應(yīng)、血管生成等過程,行使其對基因的調(diào)控功能。為了進一步研究AIF與SirT1的相互作用,我們進行了細(xì)胞內(nèi)與體外實驗兩方面的探索。在本課題中,我們通過原核表達系統(tǒng)純化的GST標(biāo)簽蛋白與His標(biāo)簽蛋白,證明AIF與SirT1能夠在體外直接結(jié)合。并且,我們在體內(nèi)實驗中證明了AIF存在乙�；揎椙襍irT1能夠?qū)ζ溥M行去乙�；�,并發(fā)現(xiàn)AIF的K295位是其主要的乙�；稽c。此外,通過凝膠阻滯實驗,我們發(fā)現(xiàn)SirT1對AIF功能的影響并不是通過去乙�；疉IF來影響AIF與DNA的結(jié)合能力,而是通過影響AIF與CypA的結(jié)合,從而抑制AIF行使誘導(dǎo)凋亡的功能。本論文的實驗結(jié)果主要通過體外的生化及功能性實驗為體內(nèi)研究AIF與SirT1的相互作用補充,同時,為AIF的翻譯后修飾研究揭開序幕,對深入研究AIF入核后行使凋亡的機制提供了依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：AIF SirT1 去乙�；� 蛋白純化 凝膠阻滯
【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要6-7
• Abstract7-9
• 文獻綜述9-16
• 第一章 SirT1蛋白與AIF蛋白結(jié)合的發(fā)現(xiàn)16-29
• 一、實驗材料、試劑與儀器16-20
• 二、實驗方法20-25
• 三、結(jié)果與分析25-27
• 四、本章小結(jié)27-29
• 第二章 凋亡誘導(dǎo)刺激下AIF與SirT1相互作用的研究29-36
• 一、實驗材料、試劑與儀器29
• 二、實驗方法29
• 三、結(jié)果與分析29-34
• 四、本章小結(jié)34-36
• 第三章 SirT1與AIF相關(guān)蛋白的體外純化及體外結(jié)合的研究36-58
• 一、實驗材料、試劑與儀器36-41
• 二、實驗方法41-50
• 三、結(jié)果與分析50-55
• 四、本章小結(jié)55-58
• 第四章 體外探究SirT1影響AIF功能的途徑58-64
• 一、實驗材料、試劑與儀器58
• 二、實驗方法58-59
• 三、結(jié)果與分析59-62
• 四、本章小結(jié)62-64
• 討論64-66
• (參與課題) KAP1473位磷酸化響應(yīng)DNA損傷應(yīng)激條件下的機制的研究66-72
• 前言66-67
• 一、實驗材料、試劑、與儀器67
• 二、實驗方法67-68
• 三、實驗結(jié)果68-70
• 四、討論70-72
• 附錄Ⅰ72-73
• 附錄Ⅱ73-74
• 參考文獻74-78
• 致謝78-79

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