本文關(guān)鍵詞：副溶血弧菌的基因分型研究

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【摘要】：目的：探明深圳地區(qū)副溶血弧菌的主要流行血清型,了解自2006年以來(lái)副溶血弧菌菌株血清型之間的差異和其流行趨勢(shì),為流行病學(xué)調(diào)查提供依據(jù)。在此基礎(chǔ)上,建立副溶血弧菌的分子分型數(shù)據(jù)庫(kù),為傳染來(lái)源的追蹤和爆發(fā)疫情的早期發(fā)現(xiàn)提供依據(jù)。本課題將從血清學(xué)分型、PFGE分型、MLVA分型方面對(duì)其進(jìn)行研究,從而逐步完善PFGE數(shù)據(jù)庫(kù)網(wǎng)絡(luò),并建立MLVA方法體系,然后進(jìn)行應(yīng)用性評(píng)價(jià),建立MLVA數(shù)據(jù)庫(kù),進(jìn)行相關(guān)聚類分析。 方法：(1)收集2006-2011年的副溶血弧菌菌株并血清型歸類,這些菌株均來(lái)自深圳市疾病預(yù)防控制中心微生物檢驗(yàn)中心菌種保存庫(kù)。其主要從食品污染物監(jiān)測(cè)網(wǎng)和深圳市感染性腹瀉病原譜哨點(diǎn)監(jiān)測(cè)網(wǎng)中獲得；(2)篩選菌株,對(duì)其進(jìn)行純培養(yǎng),采用細(xì)胞裂解,菌株包埋,酶切法對(duì)其進(jìn)行PFGE分型,采用脈沖場(chǎng)凝膠電泳成像系統(tǒng)分析,再用BioNumerics軟件進(jìn)行聚類分析；(3)純培養(yǎng)上一批菌株,用水煮法提取DNA,采用PCR方法擴(kuò)增,并送出去測(cè)序,再用BioNumerics軟件進(jìn)行MLVA聚類分析,并結(jié)合PFGE分析結(jié)果作進(jìn)一步對(duì)比與探討。 結(jié)果：(1)本實(shí)驗(yàn)對(duì)包含2006-2011年的197株VP菌株全部進(jìn)行了血清型鑒定,共分離出31種不同的血清型,其中最主流的血清型為03：K6,所占比例為45.18%；其次為04：K8,對(duì)應(yīng)比例為10.15%；O1：K25次之,對(duì)應(yīng)比例為7.11%,位居第三位；(2)99株臨床與食品外環(huán)境來(lái)源的副溶血弧菌菌株經(jīng)脈沖場(chǎng)凝膠電泳后共得到90種不同的PFGE帶型,分型效率達(dá)到99.77%；98株食源性疾病暴發(fā)來(lái)源的副溶血弧菌經(jīng)脈沖場(chǎng)凝膠電泳后共得到26種不同的PFGE帶型,分型效率達(dá)到87.71%；(3)采用6個(gè)VNTR位點(diǎn)對(duì)深圳地區(qū)的99株臨床及食品外環(huán)境來(lái)源的副溶血弧菌進(jìn)行MLVA聚類分型。由結(jié)果可知,99株VP菌被大致分成96個(gè)MLVA型別和90個(gè)PFGE型別,其分辨系數(shù)分別為99.91%和99.77%；采用6個(gè)VNTR位點(diǎn)對(duì)深圳地區(qū)的98株食源性疾病暴發(fā)來(lái)源的副溶血弧菌進(jìn)行MLVA聚類分析。由結(jié)果可知,98株VP菌被大致分成50個(gè)MLVA型別和26個(gè)PFGE型別,其分辨系數(shù)為97.14%和87.71%。結(jié)合9起確定暴發(fā)案例和2起疑似暴發(fā)案例結(jié)果,MLVA比PFGE有著更好的成簇率與聚集性,對(duì)暴發(fā)疫情的判斷更靈敏,識(shí)別能力更強(qiáng),啟動(dòng)流行病學(xué)調(diào)查更有說(shuō)服力。 結(jié)論：(1)深圳地區(qū)臨床來(lái)源的VP菌株最主流血清型為03：K6,其次是O4:K8, O3:K29,01:K25等類型,食品外環(huán)境來(lái)源的VP菌株血清型多樣化,呈分散趨勢(shì)。(2)MLVA6個(gè)位點(diǎn)的聚類分析方法對(duì)分離自臨床、食品及外環(huán)境來(lái)源的VP菌株都能很好的分型,MLVA相對(duì)于PFGE,具有更高的分辨力,操作更為簡(jiǎn)單,成本更低廉,結(jié)果更準(zhǔn)確。(3)MLVA6個(gè)位點(diǎn),即TR2、TR4、 TR5、TR8、TR9、TRIO的聯(lián)合應(yīng)用適合于VP的分子分型監(jiān)測(cè)和暴發(fā)疫情的分析,既節(jié)省工作量和工作成本又分型準(zhǔn)確。MLVA方法比PFGE在某種程度上能更好的確定和判斷暴發(fā)從而追溯暴發(fā)源頭,特別是在暴發(fā)疫情的早期發(fā)現(xiàn)中,有更好的提示作用。
【關(guān)鍵詞】：副溶血弧菌 PFGE MLVA VNTR 基因分型
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R378
【目錄】：

• 目錄4-5
• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 英文~.略詞表9-10
• 前言10-12
• 第一部分 副溶血弧菌的血清型分型12-19
• 材料與方法12-14
• 結(jié)果14-17
• 討論17-19
• 第二部分 副溶血弧菌的PFGE分型19-40
• 材料與方法19-31
• 結(jié)果31-38
• 討論38-40
• 第三部分 副溶血弧菌的MLVA分型40-56
• 材料與方法40-44
• 結(jié)果44-54
• 討論54-56
• 結(jié)論56-57
• 參考文獻(xiàn)57-60
• 綜述60-74
• 參考文獻(xiàn)71-74
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況74-75
• 致謝75-76
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷76

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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本文編號(hào)：554449