本文關(guān)鍵詞：VEGF165過表達對BMP2成骨細胞分化影響的實驗研究

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【摘要】：[目的]探討腺病毒轉(zhuǎn)染血管內(nèi)皮生長因子165(vascular endothelial growth factor 165,VEGF165)對骨形態(tài)發(fā)生蛋白(bone morphogenetic protein 2,BMP2)促成骨細胞分化的抑制性作用研究。[方法]采用密度梯度離心法分離兔骨髓間充質(zhì)干細胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),取第3代BMSCs進行細胞表型鑒定并作為細胞實驗對象,使用Ad-BMP2和Ad-BMP2-VEGF165載體體外轉(zhuǎn)染BMSCs,倒置熒光顯微鏡下觀察GFP表達變化;同時ELISA和Western blot檢測BMP2和VEGF165蛋白的表達。然后,應(yīng)用成骨細胞誘導(dǎo)培養(yǎng)液定向誘導(dǎo)BMSCs向成骨細胞分化。實驗分3組:Ad-BMP2-VEGF165轉(zhuǎn)染BMSCs組(Ad-BMP2-VEGF165組),AdBMP2轉(zhuǎn)染BMSCs組(Ad-BMP2組),BMSCs組(對照組)。分別在成骨細胞誘導(dǎo)培養(yǎng)后7、14、21 d,通過Real-time PCR分析ALP和OC mRNA相對表達水平和堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性測定、骨鈣素(Osteocalcin,OC)免疫組化染色來評價各組BMSCs成骨分化潛能的影響。[結(jié)果]第3代細胞表面高表達CD29(99.82%)、CD44(94.14%),低表達CD14(3.11%)、CD34(0.34%);腺病毒轉(zhuǎn)染后第5 h BMP2和h VEGF165蛋白水平表達最高;成骨細胞誘導(dǎo)培養(yǎng)14和21 d后,Ad-BMP2組成骨相關(guān)基因表達、OC免疫組化和ALP活性表達最高,結(jié)果與其他兩組相比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);而對照組表達最弱,與Ad-BMP2-VEGF165組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。[結(jié)論]腺病毒載體Ad-BMP2與Ad-BMP2-VEGF165轉(zhuǎn)染BMSCs后,均具有明顯促進BMSCs體外誘導(dǎo)成骨細胞分化潛能,但Ad-BMP2誘導(dǎo)作用更為顯著,同時說明VEGF165可能對BMSCs成骨細胞分化起抑制作用。
【作者單位】： 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院研究生院;濟寧醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院脊柱外科;
【關(guān)鍵詞】： 骨形態(tài)發(fā)生蛋白 血管內(nèi)皮舒張因子 骨髓間充質(zhì)干細胞 成骨細胞 腺病毒載體
【基金】：山東省自然科學(xué)基金項目(編號:ZR2010HM090) 山東省高等學(xué)�？萍加媱濏椖�(編號:J14LL04)
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 創(chuàng)傷、感染、腫瘤等因素造成的骨缺損是困擾骨科醫(yī)生的難題,如何加快骨缺損的修復(fù)是當(dāng)前骨科醫(yī)生面臨的挑戰(zhàn)[1]。近年來,隨著基因工程和組織工程技術(shù)發(fā)展,通過干細胞表達外源生長因子基因復(fù)合生物支架材料體外構(gòu)建組織工程化人工骨,為臨床治療骨缺損提供了新的思路。BMSCs具有

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本文編號：553456