本文關(guān)鍵詞：尿酸對人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化過程中Wnt信號通路的影響

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【摘要】：目的:探討不同濃度尿酸對人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(h BMSCs)成骨細(xì)胞分化過程中對Wnt/β-catenin信號通路相關(guān)基因表達(dá)的影響。方法:采用全骨髓貼壁法體外分離培養(yǎng)健康成年人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,培養(yǎng)至第3代時(shí)選取生長狀態(tài)良好的h BMSC作為研究對象。實(shí)驗(yàn)分為5組,為空白對照組及用含不同濃度尿酸(0,140,280,560μmol/L)的成骨誘導(dǎo)液進(jìn)行成骨向誘導(dǎo)分化培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)組,倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),于分化培養(yǎng)的第7天進(jìn)行細(xì)胞堿性磷酸酶成骨鑒定染色及檢測細(xì)胞成骨分化過程中堿性磷酸酶活性,第3天及第7天采用CCK-8法檢測細(xì)胞增殖能力,最后于第10天檢測利用熒光定量PCR法檢測各組細(xì)胞中Wnt信號通路中Wnt-3α,β-catenin m RNA的表達(dá),結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果:倒置顯微鏡下觀察可見大量貼壁的細(xì)胞團(tuán)簇,形態(tài)多呈紡錘形、梭形,第7天左右可見已全部貼壁,呈典型的集落樣生長,各實(shí)驗(yàn)組組細(xì)胞堿性磷酸酶染色為陽性,且隨尿酸濃度增高,染色依次加深。尿酸干預(yù)后各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞中堿性磷酸酶活性以及細(xì)胞的增殖能力較對照組明顯增高。同時(shí)細(xì)胞內(nèi)Wnt3a、β-cateninm RNA也較對照組表達(dá)增強(qiáng),并與干預(yù)尿酸濃度升高成正相關(guān),實(shí)驗(yàn)組與對照組間各實(shí)驗(yàn)指標(biāo)比較以及實(shí)驗(yàn)組各組數(shù)據(jù)間間進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析比較,P0.05,表明差別均有顯著性意義。結(jié)論:尿酸可以促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化,其機(jī)制可能為上調(diào)Wnt/β-catenin信號通路相關(guān)基因表達(dá)實(shí)現(xiàn)。
【關(guān)鍵詞】：干細(xì)胞 尿酸 人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 成骨分化 Wnt信號通路
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R580
【目錄】：

• 摘要2-3
• Abstract3-5
• 引言5-6
• 第一章 實(shí)驗(yàn)材料與方法6-13
• 1.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和材料6-7
• 1.2 配置試劑7-8
• 1.3 實(shí)驗(yàn)操作方法8-13
• 第二章 統(tǒng)計(jì)分析13-14
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果14-19
• 3.1 h BMSCs的細(xì)胞形態(tài)14-15
• 3.2 h BMSCs向成骨細(xì)胞分化后堿性磷酸酶染色鑒定結(jié)果15-16
• 3.3 h BMSCs向成骨細(xì)胞分化后堿性磷酸酶活性鑒定結(jié)果16
• 3.4 干預(yù)后h BMSCs向成骨細(xì)胞分化增值率測定16-17
• 3.5 RT-PCR檢測各組Wnt-3a、β-catenin m RNA表達(dá)水平17-19
• 第四章 討論19-21
• 結(jié)論21-22
• 參考文獻(xiàn)22-25
• 綜述25-35
• 綜述參考文獻(xiàn)31-35
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果35-36
• 致謝36-37

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：553286