本文關(guān)鍵詞：氧化低密度脂蛋白通過CD36介導(dǎo)的氧化應(yīng)激誘導(dǎo)巨噬細胞自噬

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【摘要】：目的:研究氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)對巨噬細胞自噬的誘導(dǎo)作用,并探討可能的分子機制。方法:體外培養(yǎng)RAW264.7巨噬細胞,給予抗CD36單克隆抗體(2 mg/L)、二亞苯基碘摀(diphenyleneiodonium,DPI;5μmol/L)、3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA;3 mmol/L)或雷帕霉素(1μmol/L)預(yù)處理1 h,再加入ox-LDL(100 mg/L)繼續(xù)培養(yǎng)12 h。采用MTT法檢測細胞活力,采用相應(yīng)試劑盒測定培養(yǎng)液乳酸脫氫酶(lactic dehydrogenase,LDH)、細胞內(nèi)煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)氧化酶、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性以及活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平,以評價細胞膜完整性和氧化應(yīng)激反應(yīng)。采用免疫印跡技術(shù)檢測自噬標志分子beclin-1和微管相關(guān)蛋白1輕鏈3-II(microtubule-associated protein 1 light chain 3-II,LC3-II)表達變化。結(jié)果:ox-LDL誘導(dǎo)巨噬細胞自噬反應(yīng),表現(xiàn)為beclin-1和LC3-II上調(diào);與自噬抑制劑3-MA相似,抗CD36單抗可顯著抑制ox-LDL所誘導(dǎo)的LC3-II和beclin-1表達�？笴D36單抗明顯抑制ox-LDL所誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激,包括抑制NADPH氧化酶活性和ROS、MDA水平以及升高SOD活性,其作用與NADPH氧化酶抑制劑DPI相似。另外,DPI顯著抑制ox-LDL所誘導(dǎo)的beclin-1和LC3-II表達,且ox-LDL所誘導(dǎo)的細胞活力降低和LDH漏出可被3-MA促進并可被自噬誘導(dǎo)劑雷帕霉素拮抗。結(jié)論:ox-LDL可誘導(dǎo)巨噬細胞自噬,其機制可能與CD36介導(dǎo)ox-LDL攝取進而觸發(fā)的氧化應(yīng)激有關(guān),且一定程度的自噬可減輕ox-LDL所誘導(dǎo)的巨噬細胞損傷。
【作者單位】： 泰山醫(yī)學(xué)院動脈粥樣硬化研究所 山東省高校動脈粥樣硬化重點實驗室;泰山醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院;泰山醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗科;泰山醫(yī)學(xué)院泰安市中心醫(yī)院內(nèi)分泌科;
【關(guān)鍵詞】： 自噬 氧化低密度脂蛋白 CD 氧化應(yīng)激 巨噬細胞
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(No.81202949;No.81370381)
【分類號】：R392
【正文快照】： 動脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)作為心腦血管疾病的主要病理基礎(chǔ),是一個復(fù)雜的多細胞參與的慢性炎癥性病理過程,其中修飾后的脂蛋白尤其是氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipopro-tein,ox-LDL)所誘導(dǎo)的巨噬源性泡沫細胞形成和死亡是AS發(fā)展的核心環(huán)節(jié)和造成斑塊不穩(wěn)

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本文編號：553217