發(fā)布時(shí)間：2017-07-08 03:04

  本文關(guān)鍵詞：基于細(xì)胞—基質(zhì)和細(xì)胞—細(xì)胞相互作用的體外皮膚損傷修復(fù)模型的構(gòu)建

  更多相關(guān)文章： 創(chuàng)傷修復(fù) 微柱 皮膚細(xì)胞 共培養(yǎng) 遷移

【摘要】：皮膚是人體面積最大的器官，具有阻擋異物和病原體侵入、防止體液流失等重要的屏障保護(hù)作用以及感覺、調(diào)節(jié)體溫、維持機(jī)體內(nèi)穩(wěn)態(tài)等重要的生理功能，因此，任何原因造成的皮膚損傷必須及時(shí)予以修復(fù)，否則會(huì)造成創(chuàng)面的急慢性感染甚至是機(jī)體的功能性紊亂。創(chuàng)傷修復(fù)是一個(gè)動(dòng)態(tài)的涉及到多種細(xì)胞和細(xì)胞因子的復(fù)雜過程。 傳統(tǒng)的體外建立的損傷模型主要采用劃痕法和層流技術(shù)。這兩種方法由于其簡(jiǎn)單易行等優(yōu)點(diǎn)，而在早期被廣泛使用。然而隨著新技術(shù)的出現(xiàn)，其各自的一些缺陷逐漸暴露。劃痕法實(shí)驗(yàn)操作主觀性較強(qiáng)，劃痕的寬度及力度與操作人有很大關(guān)系，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)重復(fù)性較差，難以實(shí)現(xiàn)大批樣品同時(shí)操作；劃痕邊緣的整齊度并不能保證，因此，傷口愈合程度的量化可能會(huì)有偏差；此外，此方法中，導(dǎo)致傷口愈合的原因很多，如破裂的細(xì)胞釋放的細(xì)胞質(zhì)、未受損傷的細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子、刮去部分細(xì)胞后產(chǎn)生的自由空間等，因此，很難確定是哪種因素在影響傷口愈合的速率。層流技術(shù)克服了劃痕法的一些缺點(diǎn)，可以形成整齊的損傷邊緣，可以實(shí)現(xiàn)高通量操作，然而此方法仍有一些不足如胰酶對(duì)單層細(xì)胞的局部消化會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞張力的變化，進(jìn)而影響細(xì)胞的整體遷移效果。此外，這兩種方法都是建立在平面上的，即細(xì)胞在平面上生長(zhǎng)、增殖并且遷移，且大多研究對(duì)象只是單種細(xì)胞的損傷與修復(fù)，然而體內(nèi)，細(xì)胞是嵌插在各種復(fù)雜的細(xì)胞外基質(zhì)中且與各種細(xì)胞相互作用。 為了更真實(shí)的模擬體內(nèi)細(xì)胞所處的真實(shí)環(huán)境，本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)了建立在微柱基底上的基于三種細(xì)胞(表皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞)共培養(yǎng)的損傷模型。三種細(xì)胞都密切參與皮膚創(chuàng)傷修復(fù)過程，表皮與成纖維細(xì)胞間的相互作用對(duì)重新上皮化很重要，而成纖維與內(nèi)皮細(xì)胞間相互作用則對(duì)血管新生很重要。此模型主要是通過一層有矩形空隙的擋板層來實(shí)現(xiàn)三種細(xì)胞的共培養(yǎng)以及損傷的形成。利用此模型，我們實(shí)現(xiàn)了三種細(xì)胞的區(qū)域化接種、分析了三種細(xì)胞對(duì)微柱基底做出的不同響應(yīng)、制造了實(shí)際上并沒有對(duì)細(xì)胞本身造成真正損傷的損傷、動(dòng)態(tài)跟蹤了損傷后各細(xì)胞向損傷處遷移的過程且分析了三種細(xì)胞間的相互作用。結(jié)果表明，首先，擋板層可以發(fā)揮其預(yù)期作用，使各種細(xì)胞限定在特定區(qū)域且細(xì)胞間沒有交叉污染現(xiàn)象，可以形成邊緣整齊的損傷，損傷兩側(cè)細(xì)胞可以遷移至損傷處將損傷愈合。其次，微柱會(huì)影響細(xì)胞的粘附率，改變細(xì)胞的形態(tài)、骨架分布以及核形態(tài)，說明細(xì)胞會(huì)依據(jù)基底地形來調(diào)整自己的行為。損傷遷移實(shí)驗(yàn)表明共培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞遷移的方向性增強(qiáng)，且不同條件下(細(xì)胞共培養(yǎng)與單培養(yǎng))各細(xì)胞的遷移情況是不同的，說明細(xì)胞間相互作用會(huì)影響細(xì)胞的遷移行為�？傊緦�(shí)驗(yàn)建立了一種新的損傷修復(fù)模型，，可以同時(shí)研究細(xì)胞與基質(zhì)以及細(xì)胞與細(xì)胞之間的相互作用，為其他既涉及到細(xì)胞與基質(zhì)相互作用又涉及到細(xì)胞與細(xì)胞間相互作用的生理過程如胚胎形成、組織工程等的研究提供了有效的技術(shù)手段。
【關(guān)鍵詞】：創(chuàng)傷修復(fù) 微柱 皮膚細(xì)胞 共培養(yǎng) 遷移
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-13
• 文獻(xiàn)綜述13-25
• 第一章 文獻(xiàn)綜述13-25
• 1.1 皮膚及其創(chuàng)傷修復(fù)13-16
• 1.1.1 皮膚的結(jié)構(gòu)和功能13-14
• 1.1.2 皮膚創(chuàng)傷修復(fù)及其修復(fù)機(jī)理14-15
• 1.1.3 參與皮膚傷口愈合的細(xì)胞及其作用15-16
• 1.2 皮膚創(chuàng)傷修復(fù)模型研究進(jìn)展16-20
• 1.3 3D 細(xì)胞培養(yǎng)研究進(jìn)展20-24
• 本研究目的和意義24-25
• 實(shí)驗(yàn)研究25-58
• 第二章 芯片的設(shè)計(jì)制備及其表征25-28
• 2.1 設(shè)備與材料25
• 2.1.1 主要設(shè)備25
• 2.1.2 主要試劑及耗材25
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法25-26
• 2.2.1 芯片的設(shè)計(jì)及其制備25-26
• 2.2.2 芯片結(jié)構(gòu)的表征26
• 2.3 結(jié)果與分析26-27
• 2.3.1 芯片的設(shè)計(jì)制備及其表征26-27
• 2.4 小結(jié)27-28
• 第三章 芯片內(nèi)細(xì)胞的圖形化培養(yǎng)及其接種密度優(yōu)化28-34
• 3.1 儀器與試劑28
• 3.1.1 主要儀器28
• 3.1.2 主要試劑28
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法28-29
• 3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)28
• 3.2.2 芯片表面處理28-29
• 3.2.3 芯片上細(xì)胞區(qū)域化接種和培養(yǎng)以及接種密度優(yōu)化29
• 3.3 結(jié)果與分析29-31
• 3.3.1 各個(gè)細(xì)胞接種密度優(yōu)化結(jié)果29-31
• 3.4 討論31-33
• 3.5 小結(jié)33-34
• 第四章 微柱對(duì)細(xì)胞粘附、形態(tài)、骨架分布以及核形態(tài)的影響34-49
• 4.1 儀器與試劑34
• 4.1.1 主要儀器34
• 4.1.2 主要試劑34
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法34-36
• 4.2.1 微柱對(duì)細(xì)胞粘附的影響34-35
• 4.2.2 細(xì)胞骨架及細(xì)胞核熒光染色35
• 4.2.3 掃描電鏡技術(shù)35
• 4.2.4 細(xì)胞形態(tài)學(xué)分析35-36
• 4.3 結(jié)果與分析36-47
• 4.3.1 微柱對(duì)細(xì)胞粘附的影響36-38
• 4.3.2 微柱對(duì)細(xì)胞形態(tài)、骨架分布以及核形態(tài)的影響38-47
• 4.3.2.1 微柱對(duì)細(xì)胞形態(tài)的影響38-44
• 4.3.2.2 微柱對(duì)細(xì)胞骨架和核形態(tài)的影響44-47
• 4.4 討論47-48
• 4.5 小結(jié)48-49
• 第五章 損傷愈合實(shí)驗(yàn)49-58
• 5.1 儀器與試劑49-50
• 5.1.1 主要儀器49
• 5.1.2 主要試劑49-50
• 5.2 實(shí)驗(yàn)方法50-51
• 5.2.1 活細(xì)胞熒光染色50
• 5.2.2 芯片上細(xì)胞的區(qū)域化接種、培養(yǎng)和損傷的形成50
• 5.2.3 損傷愈合的分析50-51
• 5.2.4 細(xì)胞遷移的方向性分析51
• 5.3 結(jié)果與分析51-56
• 5.3.1 活體染色結(jié)果51
• 5.3.2 損傷模型的構(gòu)建51-52
• 5.3.3 損傷愈合結(jié)果分析52-54
• 5.3.4 細(xì)胞遷移的方向性分析54-55
• 5.3.5 細(xì)胞在微柱與平面交界處的行為55-56
• 5.4 討論56
• 5.5 小結(jié)56-58
• 總結(jié)與展望58-59
• 參考文獻(xiàn)59-63
• 縮略詞63-64
• 致謝64-65
• 作者簡(jiǎn)介65

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 屈紀(jì)富,程天民,郝利;參與皮膚傷口愈合的細(xì)胞及其作用的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代康復(fù);2001年24期

本文編號(hào)：532767