本文關(guān)鍵詞：aFGF誘導(dǎo)大鼠BMSCs分化為NSCs的實驗研究

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【摘要】：第一部分大鼠BMSCs的體外培養(yǎng)、純化和鑒定 目的：體外培養(yǎng)并純化大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）；研究其生物學(xué)特性；檢測細(xì)胞表面標(biāo)志物以鑒定細(xì)胞。 方法：采用全骨髓貼壁培養(yǎng)法對大鼠BMSCs進(jìn)行培養(yǎng)，并通過傳代培養(yǎng)進(jìn)行純化細(xì)胞。在倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)特征；通過四甲基偶氮唑鹽（MTT）法以繪制細(xì)胞的生長曲線；用流式細(xì)胞儀（FCM）測定第3代BMSCs的細(xì)胞周期，并鑒定細(xì)胞表面標(biāo)志物。 結(jié)果：培養(yǎng)的細(xì)胞呈貼壁生長，表現(xiàn)為長梭形、多角形。第1、3、5代細(xì)胞的生長曲線均呈S形，活性無明顯差異。細(xì)胞周期顯示94.34%細(xì)胞處于G0/G1期，有較強的分裂增殖能力。FCM檢測CD29、CD54、CD90表達(dá)陽性，CD45表達(dá)陰性。 結(jié)論：全骨髓貼壁培養(yǎng)法能培養(yǎng)出高純度的大鼠BMSCs。細(xì)胞生長穩(wěn)定、增殖快、可多次傳代，具有干細(xì)胞特性。 第二部分aFGF誘導(dǎo)大鼠BMSCs分化為NSCs并鑒定NSCs 目的：研究酸性成纖維細(xì)胞生長因子（aFGF）誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）分化為神經(jīng)干細(xì)胞（NSCs）的可行性，最佳作用劑量和最佳誘導(dǎo)時間，并鑒定分化前后的細(xì)胞。 方法：全骨髓貼壁培養(yǎng)法培養(yǎng)大鼠BMSCs。實驗組（aFGF誘導(dǎo)組-A組）分別用10、20、40、60、80、100、120ng/ml aFGF進(jìn)行誘導(dǎo)分化，陽性對照組（bFGF誘導(dǎo)組-B組）用20ng/ml bFGF誘導(dǎo)分化，陰性對照組（N組）不加任何誘導(dǎo)劑。在倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞誘導(dǎo)前后的形態(tài)特征變化。逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測各組細(xì)胞神經(jīng)巢蛋白（Nestin）、神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）的基因表達(dá)。免疫熒光染色法檢測Nestin、NSE的蛋白表達(dá)。 結(jié)果：RT-PCR結(jié)果顯示Nestin、NSE mRNA在不同組均有表達(dá)，aFGF的最佳作用劑量為80ng/ml。以80ng/ml的aFGF進(jìn)行后續(xù)誘導(dǎo)分化實驗，RT-PCR結(jié)果顯示以誘導(dǎo)6h后A組中Nestin mRNA表達(dá)最強，與其余各組比較（P0.05），差異有統(tǒng)計學(xué)意義；隨著誘導(dǎo)時間的延長，Nestin mRNA表達(dá)呈逐漸減弱趨勢。在誘導(dǎo)6d后各組比較，，A組中NSE mRNA表達(dá)最強，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。誘導(dǎo)6h后可見少數(shù)細(xì)胞的胞體收縮成橢圓形并伸出細(xì)長突起，免疫熒光染色顯示Nestin蛋白表達(dá)陽性；誘導(dǎo)6d后絕大部分細(xì)胞突起呈兩極或多極形狀，并交織成網(wǎng)狀，免疫熒光染色顯示NSE蛋白表達(dá)陽性。 結(jié)論：aFGF能在體外誘導(dǎo)大鼠BMSCs分化為NSCs，是一種有效的生物誘導(dǎo)劑，其最佳作用劑量為80ng/ml。誘導(dǎo)分化而成的細(xì)胞可以再度分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞，從而在功能上鑒定了NSCs。BMSCs經(jīng)aFGF誘導(dǎo)6h后細(xì)胞具有NSCs特性，說明6h為aFGF的最佳誘導(dǎo)時間。
【關(guān)鍵詞】：全骨髓貼壁培養(yǎng)法 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 細(xì)胞表面標(biāo)志物 大鼠 aFGF NSCs 誘導(dǎo) 分化
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-6
• 摘要6-9
• ABSTRACT9-13
• 前言13-18
• 參考文獻(xiàn)16-18
• 第一部分 大鼠 BMSCs 的體外培養(yǎng)、純化與鑒定18-26
• 1 材料和方法18-22
• 2 結(jié)果22-24
• 3 討論24-25
• 參考文獻(xiàn)25-26
• 第二部分 aFGF 誘導(dǎo)大鼠 BMSCs 分化為 NSCs 并鑒定 NSCs26-40
• 1 材料和方法27-32
• 2 結(jié)果32-37
• 3 討論37-38
• 參考文獻(xiàn)38-40
• 全文總結(jié)40-41
• 文獻(xiàn)綜述41-50
• 參考文獻(xiàn)46-50
• 致謝50-51
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文51-52

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉永良;孫培;李澤福;隋德華;劉鵬飛;邵偉;;Wistar大鼠骨髓源性神經(jīng)干細(xì)胞分離與培養(yǎng)及其鑒定[J];濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2010年06期

2 鄢文海;許p芑

本文編號：522334