本文關鍵詞：用無血清適應的Vero細胞培養(yǎng)H5N1型流感病毒條件的優(yōu)化，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的優(yōu)化無血清適應的Vero細胞(SFM-Vero細胞)培養(yǎng)H5N1型流感病毒的條件。方法將H5N1型流感病毒接種于SFM-Vero細胞,于免疫熒光顯微鏡下觀察病毒感染情況。對病毒無血清培養(yǎng)條件MOI(0.05、0.10、0.15、0.20)、細胞培養(yǎng)時間(12、24、36、48 h)、培養(yǎng)液基礎培養(yǎng)基(DMEM/F12、M199、RPMI1640及MEM:DMEM/F12混合液)、培養(yǎng)溫度(33、33.5、34、34.5、35和37℃)、收獲時間(24、36、48、60和72 h)、培養(yǎng)液p H值(6.8、7.1、7.4、7.7、8.0和8.3)和TPCK胰酶濃度(0.5、1.0、1.5μg/ml)進行優(yōu)化,并檢測最佳條件無血清培養(yǎng)的H5N1型流感病毒的血凝效價及形態(tài)。結(jié)果 H5N1型流感病毒對SFM-Vero細胞具有感染性。最佳無血清培養(yǎng)條件為:MOI=0.1和0.15,細胞培養(yǎng)時間36 h,以DMEM/F12為基礎培養(yǎng)基,病毒培養(yǎng)溫度33.5和34.5℃,病毒收獲時間60 h,培養(yǎng)液p H 7.7,TPCK胰酶濃度為1.0μg/ml。最佳條件無血清培養(yǎng)的H5N1型流感病毒的血凝效價為1∶512,電鏡下觀察病毒形態(tài)完整。結(jié)論確定了H5N1型流感病毒對SFM-Vero細胞具有感染性,并優(yōu)化了SFMVero細胞培養(yǎng)流感病毒的適宜條件,為更具有生物安全性流感疫苗的研發(fā)奠定了基礎。
【作者單位】： 中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院醫(yī)學生物學研究所云南省重大傳染病疫苗研發(fā)重點實驗室;南開大學生命科學學院;
【關鍵詞】： 無血清培養(yǎng) Vero細胞 HN型流感病毒
【基金】：重大傳染病專項(2013ZX10004003003) 科技部對俄合作專項(2011DFR30420) 國家863(2012AA02A404任務7)
【分類號】：R373.13
【正文快照】： 近年來,高致病性的禽流感病毒嚴重威脅公眾健康[1]。據(jù)世界衛(wèi)生組織報道,全球范圍內(nèi)感染H5N1型禽流感的496例患者中,有293人死亡[2]。目前,接種疫苗是預防高致病性的流感病毒感染最有效的手段。Vero細胞系是目前公認的可作為人用疫苗生產(chǎn)基質(zhì)的細胞系之一[3],其可采用微載體發(fā)

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本文編號：481843