本文關(guān)鍵詞：重構(gòu)大鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞骨架對(duì)AQP4和Kir4.1基因表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：探討大鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞體外分離、純化及培養(yǎng)條件,并對(duì)其進(jìn)行鑒定；探討不同濃度微絲聚合齊Jasplakinolide (JSK)和不同濃度的微絲解聚劑細(xì)胞松弛素D(Cytochalasin D, Cyt D)對(duì)大鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞骨架的影響；探討JSK及Cyt D對(duì)大鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞AQP4和Kir4.1基因表達(dá)的影響。 方法：取新生SD大鼠10只,在無(wú)菌條件下分離出脊髓組織,體外培養(yǎng)原代大鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞,并采用免疫熒光法檢測(cè)GFAP蛋白的表達(dá)對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行鑒定；將星形膠質(zhì)細(xì)胞分為JSK實(shí)驗(yàn)組和Cyt D實(shí)驗(yàn)組并設(shè)立空白對(duì)照組。JSK實(shí)驗(yàn)組采用濃度為0.05μg/ml、0.10μg/ml、0.20μg/ml、0.40μg/ml、0.80μg/ml和1.00μg/ml的JSK分別干預(yù)細(xì)胞2h、12h和24h；對(duì)于Cyt D組采用濃度為0.05μg/ml、0.10μg/ml、0.20μg/ml、0.40μg/ml、0.80μg/ml和1.00μg/ml的Cyt D分別干預(yù)細(xì)胞2h、12h和24h,MTT法檢測(cè)不同濃度的JSK及Cyt D對(duì)大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞的增殖的影響；采用鬼筆環(huán)肽和Hoechst33342染色,激光共聚焦顯微鏡觀察不同濃度的JSK及Cyt D對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞骨架的影響；Real-time PCR法檢測(cè)不同濃度的JSK及Cyt D對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞中AQP4和Kir4.1mRNA的表達(dá)水平的影響。 結(jié)果：大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞體外培養(yǎng)14天后,細(xì)胞鋪滿培養(yǎng)皿,GFAP蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為90,符合進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)要求；MTT檢測(cè)結(jié)果顯示,與空白對(duì)照組相比,應(yīng)用濃度為JSK0.05μg/ml、0.10μg/ml、0.20μg/ml和0.40μg/ml干預(yù)細(xì)胞2h后,細(xì)胞的抑制率無(wú)明顯差異(P0.05),干預(yù)細(xì)胞12h和24h后具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05); Cyt D組MTT結(jié)果顯示,0.05μg/ml、0.10μg/ml、0.20μg/ml和0.40μg/ml濃度的Cyt D干預(yù)2h后,細(xì)胞的抑制率無(wú)明顯差異(P0.05),干預(yù)細(xì)胞12h和24h后具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；激光共聚焦顯微鏡觀察結(jié)果顯示,各濃度的JSK作用于星形膠質(zhì)細(xì)胞2h后,均能使細(xì)胞微絲發(fā)生團(tuán)聚,各Cyt D作用大鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞2h后,微絲發(fā)生解聚、彎曲,但極性未失；Real-time PCR檢測(cè)顯示,在0.05μg/ml、0.10μg/ml、0.20μg/ml、0.40μg/ml濃度的JSK作用2h后,可以顯著降低細(xì)胞中AQP4和Kir4.1基因的表達(dá),與空白對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);而0.05μg/ml、0.10μg/ml、0.20μg/ml和0.40μg/ml濃度的Cyt D能夠上調(diào)AQP1、AQP4和Kit4.1基因的表達(dá)與空白對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論：大鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞可以進(jìn)行體外培養(yǎng)；JSK和Cyt D可使大鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞微絲發(fā)生重構(gòu)；JSK和Cyt D分別可以下調(diào)AQP4和Kir4.1基因的表達(dá)及上調(diào)AQP4和Kir4.1基因的表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：星形膠質(zhì)細(xì)胞 細(xì)胞骨架 水通道蛋白
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-9
• 第一章 前言9-12
• 第二章 文獻(xiàn)回顧12-13
• 第三章 細(xì)胞松弛素D重構(gòu)大鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞骨架對(duì)AQP1、AQP4和Kir4.1基因表達(dá)的影響13-25
• 3.1 材料與方法13-18
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物13
• 3.1.2 主要儀器與試劑13-15
• 3.1.3 主要溶液的配制15
• 3.1.4 星形膠質(zhì)細(xì)胞的培養(yǎng)15-16
• 3.1.5 星形膠質(zhì)細(xì)胞的傳代培養(yǎng)16
• 3.1.6 星形膠質(zhì)細(xì)胞的鑒定16
• 3.1.7 MTT檢測(cè)16-17
• 3.1.8 激光共聚焦顯微觀察17
• 3.1.9 實(shí)時(shí)熒光定量法檢測(cè)基因的表達(dá)17-18
• 3.1.9.1 細(xì)胞總RNA提取17
• 3.1.9.2 RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA17-18
• 3.1.9.3 Real-time PCR18
• 3.1.9.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析18
• 3.2 結(jié)果18-22
• 3.2.1 原代大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞的培養(yǎng)及鑒定18-19
• 3.2.2 Cyt D對(duì)細(xì)胞增殖的影響19
• 3.2.3 Cyt D對(duì)細(xì)胞骨架的影響19-22
• 3.2.4 Cyt D對(duì)AQP1,AQP4及Kir 4.1基因的表達(dá)的影響22
• 3.3 討論22-25
• 第四章 Jasplakinolide重構(gòu)大鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞骨架對(duì)AQP4和Kir4.1基因表達(dá)的影響25-37
• 4.1 材料和方法25-30
• 4.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物25
• 4.1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器與實(shí)驗(yàn)試劑25-26
• 4.1.2.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器25-26
• 4.1.2.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑26
• 4.1.3 主要溶液的配制26-27
• 4.1.4 星形膠質(zhì)細(xì)胞的培養(yǎng)27
• 4.1.5 星形膠質(zhì)細(xì)胞的傳代培養(yǎng)27
• 4.1.6 星形膠質(zhì)細(xì)胞的鑒定27-28
• 4.1.7 MTT檢測(cè)28
• 4.1.8 激光共聚焦顯微觀察28
• 4.1.9 實(shí)時(shí)熒光定量法檢測(cè)基因的表達(dá)28-30
• 4.1.9.1 細(xì)胞總RNA提取28-29
• 4.1.9.2 RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA29
• 4.1.9.3 Real-time PCR29
• 4.1.9.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析29-30
• 4.2 結(jié)果30-34
• 4.2.1 大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞的培養(yǎng)與鑒定30
• 4.2.2 JSK對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖的影響30
• 4.2.3 JSK對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞骨架的影響30-33
• 4.2.4 JSK對(duì)AQP4及Kir4.1基因的表達(dá)的影響33-34
• 4.3 討論34-37
• 第五章 參考文獻(xiàn)37-39
• 第六章 小結(jié)39-40
• 在學(xué)校期間的研究成果40-41
• 縮略詞表41-42
• 致謝42

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 王克萬(wàn),漆松濤,楊志煥,王正國(guó),朱佩芳,楊開(kāi)軍,劉承勇,黃理金;培養(yǎng)大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞牽張損傷后超微結(jié)構(gòu)的變化[J];第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2002年08期

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3 王彥明;余家闊;于長(zhǎng)隆;敖英芳;王健全;崔國(guó)慶;胡躍林;;Pridie鉆孔術(shù)修復(fù)膝關(guān)節(jié)軟骨全層缺損的臨床療效觀察[J];中國(guó)微創(chuàng)外科雜志;2006年11期

  本文關(guān)鍵詞：重構(gòu)大鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞骨架對(duì)AQP4和Kir4.1基因表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：481479