本文關(guān)鍵詞：CHD1L與人胚胎干細胞自我更新的初探，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：人胚胎干細胞(human embryonic stem cells, hESCs)具有多譜系分化和自我更新能力,使得其在再生醫(yī)學研究領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。但其自我更新和多能性的維持機制仍不清楚,有待進一步的研究。近年來發(fā)現(xiàn)了一系列的染色質(zhì)修飾因子在hESCs的自我更新和多能性的維持中發(fā)揮重要的作用。CHD1L是在人肝癌細胞中發(fā)現(xiàn)的一個基因,主要與染色質(zhì)解旋、DNA的損傷修復(fù)、細胞的增殖和凋亡等細胞過程相關(guān)。CHD1L在小鼠的內(nèi)細胞團(inner cell mass, ICM)和小鼠胚胎干細胞中高表達。目前,尚未見到人hESCs對CHD1L的研究報道。 本研究通過構(gòu)建可調(diào)控的CHD1L敲減和過表達的hESCs穩(wěn)定系,研究CHD1L敲減和過表達后hESCs的自我更新、增殖、多能性和自我更新相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄是否發(fā)生改變,來研究CHD1L在hESCs的自我更新中發(fā)揮的作用。 研究發(fā)現(xiàn),①CHD1L蛋白在]hESCs中高表達,在成纖維細胞中表達極低；并且CHD1L蛋白的表達隨著hESCs的分化而下降；②CHD1L過表達和敲減均能夠抑制iESCs的自我更新和細胞的增殖；③在hESCs中過表達CHD1L后自我更新和多能性相關(guān)基因的表達受到明顯的抑制�？傊�,通過上述的研究可知CHD1L在hESCs的自我更新中發(fā)揮重要的作用,CHDIL的過表達和敲減均能夠?qū)е伦晕腋履芰Φ慕档?但具體的機制仍有待更為深入的研究來發(fā)現(xiàn)。
【關(guān)鍵詞】：人胚胎干細胞 CHD1L 自我更新
【學位授予單位】：中南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R329
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 專業(yè)名稱~.寫中英文對照表11-12
• 1 前言12-16
• 1.1 人胚胎干細胞12
• 1.2 人胚胎干細胞自我更新的維持12
• 1.3 人胚胎干細胞自我更新相關(guān)基因的研究方法12-13
• 1.4 推測CHD1L可能參與人胚胎干細胞的自我更新13-15
• 1.4.1 CHD1L基因的結(jié)構(gòu)13
• 1.4.2 CHD1L的功能13-14
• 1.4.3 CHD1L與胚胎干細胞的自我更新14-15
• 1.5 研究CHD1L與人胚胎干細胞的自我更新的技術(shù)路線15-16
• 2 研究材料、試劑和耗材16-20
• 2.1 細胞和質(zhì)粒載體16
• 2.2 細胞培養(yǎng)試劑16
• 2.3 分子實驗試劑16-17
• 2.4 實驗用耗材17-18
• 2.5 實驗儀器18-19
• 2.6 引物列表19-20
• 3 實驗技術(shù)和方法20-28
• 3.1 Gateway克隆方法20
• 3.1.1 利用高保真酶克隆目的基因的ORF片段20
• 3.1.2 BP克隆方法20
• 3.1.3 LR克隆方法20
• 3.1.4 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化20
• 3.2 質(zhì)粒DNA的抽提20-21
• 3.3 慢病毒顆粒包裝21
• 3.4 人胚胎干細胞培養(yǎng)21-22
• 3.4.1 小鼠的Feeder支持下的hESCs培養(yǎng)方法21-22
• 3.4.2 hESCs的無飼養(yǎng)層培養(yǎng)體系22
• 3.4.3 培養(yǎng)基配方22
• 3.5 RNA的抽提和cDNA的合成22-23
• 3.5.1 RNA的抽提步驟22
• 3.5.2 cDNA的合成22-23
• 3.6 PCR檢測23
• 3.7 realtime-PCR檢測23
• 3.8 免疫熒光染色23-24
• 3.9 Western blot檢測蛋白表達24-28
• 3.9.1 Western blot實驗所需試劑配方24
• 3.9.2 細胞總蛋白質(zhì)的提取24-25
• 3.9.3 測量所提蛋白質(zhì)的濃度25
• 3.9.4 聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)25-26
• 3.9.5 轉(zhuǎn)膜(半干轉(zhuǎn))和封閉26
• 3.9.6 抗體雜交26-27
• 3.9.7 ECL化學發(fā)光顯影27-28
• 4 實驗結(jié)果28-55
• 4.1 CHD1L在人ESC和分化后細胞中的表達28-34
• 4.1.1 CHD1L在人ESC和成纖維細胞中的表達28-30
• 4.1.2 CHD1L在人ESC的EB分化中的表達變化30-34
• 4.2 CHD1L過表達和敲減質(zhì)粒載體的構(gòu)建34-40
• 4.2.1 構(gòu)建CHD1L的誘導表達慢病毒質(zhì)粒載體34-37
• 4.2.2 構(gòu)建CHD1L誘導敲減的慢病毒質(zhì)粒載體37-40
• 4.3 CHD1L過表達和敲減的人胚胎干細胞系的建立和鑒定40-46
• 4.3.1 過表達和敲減CI-ID1L的人ESC系的建立過程40-43
• 4.3.2 過表達和敲減CHD1L的ES細胞系進行鑒定43-46
• 4.4 CHD1L敲減和過表達影響人ESC的自我更新46-47
• 4.5 敲減和過表達CHD1L后對人ESC增殖的影響47-48
• 4.6 人ESC中過表達和敲減CHD1L后自我更新和多能性相關(guān)基因的表達48-51
• 4.7 CHD1L敲減和過表達對人ESC的EB分化的影響51-55
• 5 討論55-58
• 5.1 CHD1L在hESC和分化后細胞中表達的比較55
• 5.2 hESC中敲減和過表達CHD1L均抑制其自我更新55-56
• 5.3 hESC中敲減和過表達CHD1L后抑制細胞的增殖56
• 5.4 hESC在過表達抑制多能性和自我更新相關(guān)基因的表達56
• 5.5 在hESC的EB分化中敲減和過表達CHD1L56-58
• 6 結(jié)論58-59
• 參考文獻59-62
• 綜述62-67
• 參考文獻65-67
• 致謝67

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 勞艷萍;柯浩;孫洪亮;劉榮立;馬玉潔;阮秋燕;雷釧;陸鳳花;李湘萍;石德順;;糖原合成激酶抑制劑在胚胎干細胞自我更新中的作用[J];中國畜牧獸醫(yī);2013年10期

2 袁存存;焦鋒;胡海;;胃癌組織中CHD1L表達及其臨床意義[J];山東醫(yī)藥;2014年10期

3 鄧云剛;黃文峰;賴劍;劉曉平;鄧龍穎;章新華;;CHD1L在結(jié)腸癌中表達與沉默對人結(jié)腸癌細胞遷移與侵襲的影響[J];世界華人消化雜志;2014年29期

4 鄧云剛;黃文峰;賴劍;劉曉平;鄧龍穎;章新華;;CHD1L在結(jié)直腸癌中的表達及其對細胞增殖的影響[J];世界華人消化雜志;2014年35期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 沈國芳;Rho GTP酶抑制劑辛伐他汀和Y27632調(diào)控小鼠胚胎干細胞心肌分化和自我更新機制研究[D];浙江大學;2014年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 勞艷萍;GSK3抑制劑對水牛類胚胎干細胞培養(yǎng)效果的影響[D];廣西大學;2013年

  本文關(guān)鍵詞：CHD1L與人胚胎干細胞自我更新的初探，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：475277