本文關(guān)鍵詞：兔頸動(dòng)脈瘤模型的建立及基礎(chǔ)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分：模型建立及驗(yàn)證 目的：1.采用彈力蛋白酶（elastase,EA）誘導(dǎo)法建立一種能夠用于新型介入材料研究的兔頸動(dòng)脈瘤模型；2.行血管內(nèi)介入造影(DSA)檢查用于兔頸動(dòng)脈瘤模型成瘤率的驗(yàn)證，確認(rèn)兔頸動(dòng)脈瘤模型采用此方法建立的可行性。 方法：1.選擇由第四軍醫(yī)大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)飼養(yǎng)中心提供的健康成年40只新西蘭大白兔，體重約3～4kg左右,雌雄各半。隨機(jī)分為4組,A組（對(duì)照組）；B組（2周組）；C組（3周組）；D組（4周組），對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組每組10只新西蘭大白兔飼養(yǎng)方法條件一致。2.實(shí)驗(yàn)組B組、C組、D組麻醉后采用外科手術(shù)方法，于顯微鏡下小心分離暴露新西蘭大白兔右側(cè)頸總動(dòng)脈起始段，用顯微鑷仔細(xì)小心地剝離血管外膜表面的纖維結(jié)締組織，用游標(biāo)卡尺比對(duì)在距離兔右側(cè)頸總動(dòng)脈起始端約2.0cm處2-0手術(shù)絲線(xiàn)結(jié)扎頸總動(dòng)脈，使用顯微外科血管夾小心輕柔夾閉右側(cè)頸總動(dòng)脈起始端，注意保護(hù)迷走神經(jīng)不要誤夾以致?lián)p傷，在右側(cè)頸總動(dòng)脈起始端形成一密閉管腔，于密閉管腔末端使用針頭帶有細(xì)長(zhǎng)軟管的1ml注射器吸取含肝素鈉的生理鹽水多次反復(fù)沖洗密閉管腔至無(wú)血水殘留，于密閉管腔內(nèi)小心注射預(yù)先配置好的0.1ml含70U的彈力蛋白酶溶液，并同時(shí)用2-0手術(shù)絲線(xiàn)結(jié)扎管腔末端保持密閉管腔充盈膨脹，血管及周?chē)M織滴注生理鹽水保持濕潤(rùn)，20分鐘后松開(kāi)右側(cè)頸總動(dòng)脈起始端顯微外科血管夾。對(duì)照組手術(shù)方法及過(guò)程同實(shí)驗(yàn)組，只是對(duì)照組在密閉管腔內(nèi)注射的彈力蛋白酶變替換為生理鹽水。3.術(shù)后各組動(dòng)物模型均在各自設(shè)定的時(shí)間段給予行經(jīng)股動(dòng)脈穿刺的兔頸動(dòng)脈瘤血管造影術(shù)(DSA)，通過(guò)影像學(xué)直接地觀(guān)察動(dòng)脈瘤的大小、形態(tài)與載瘤動(dòng)脈的關(guān)系，根據(jù)動(dòng)脈瘤內(nèi)血流是否通暢判斷成瘤率，驗(yàn)證此方法建立的兔頸動(dòng)脈瘤模型是否成功。 結(jié)果：模型建立2周后，對(duì)照組存活7只兔子（因?yàn)榇私M最先做，易麻醉過(guò)量致死），實(shí)驗(yàn)組存活27只兔子。經(jīng)血管造影（DSA）觀(guān)察到對(duì)照組兔右側(cè)頸總動(dòng)脈血管起始端形成一長(zhǎng)約0.3～1.5cm左右的盲端，正常頸總動(dòng)脈血管的生理解剖結(jié)構(gòu)及形態(tài)走形消失。實(shí)驗(yàn)組存活27只兔子（3只因肺部感染死亡），實(shí)驗(yàn)組采用彈力蛋白酶誘導(dǎo)法建立兔頸動(dòng)脈瘤模型中，6只動(dòng)脈瘤閉塞；21只模型成功建立，其動(dòng)脈瘤高約0.3~1.3cm之間，瘤頸寬度在0.3~1.2cm之間。實(shí)驗(yàn)組總的成瘤率在80%左右，實(shí)驗(yàn)組各組間成瘤率比較無(wú)明顯差別（P＞0.05）。 結(jié)論：采用彈力蛋白酶誘導(dǎo)法，能夠在較短時(shí)間內(nèi)成功建立理想兔頸動(dòng)脈瘤模型，該模型制作方法簡(jiǎn)單，模型存活時(shí)間長(zhǎng)，能夠順利地應(yīng)用于動(dòng)脈瘤的介入栓塞治療及后期研究；血管內(nèi)介入造影術(shù)(DSA)能夠準(zhǔn)確的驗(yàn)證彈力蛋白酶誘導(dǎo)法建立的動(dòng)脈瘤模型是否成功，是檢驗(yàn)動(dòng)脈瘤的金標(biāo)準(zhǔn)，是后期動(dòng)脈瘤模型用于新型材料介入治療及效果評(píng)價(jià)的首選必備方法。 第二部分：VEGF、TGF-β在模型中的表達(dá)情況及機(jī)制的探究 目的：1.采用常規(guī)HE染色方法觀(guān)察兔頸動(dòng)脈瘤模型動(dòng)脈瘤壁的組織病理學(xué)變化及瘤壁結(jié)構(gòu)的重塑；2.采用免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）、血管轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（TGF-β）在彈力蛋白酶誘導(dǎo)法建立的兔頸動(dòng)脈瘤模型動(dòng)脈瘤壁中的表達(dá)，研究、探討VEGF、TGF-β在動(dòng)脈瘤壁發(fā)生血管壁重塑過(guò)程的作用及相關(guān)性，探討動(dòng)脈瘤發(fā)生的機(jī)制。 方法：1.在各實(shí)驗(yàn)組相應(yīng)時(shí)間段2周、3周、4周，采用外科手術(shù)法，于顯微鏡下分離充分暴露各實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物模型的右側(cè)頸部動(dòng)脈瘤，觀(guān)察動(dòng)脈瘤的生長(zhǎng)情況，并使用游標(biāo)卡尺、圓規(guī)測(cè)量動(dòng)脈瘤的大�。龈叨�、頸寬度、瘤寬度）等，并取該實(shí)驗(yàn)組各組動(dòng)物模型的動(dòng)脈瘤，組織包埋，冰凍切片機(jī)刀片平行于原頸總動(dòng)脈血管橫截面進(jìn)行切片，冰凍切片保存足夠數(shù)量標(biāo)本(用于HE染色、免疫組織化學(xué)染色)，經(jīng)HE染色處理動(dòng)脈瘤瘤壁，使用高倍光學(xué)攝像顯微鏡觀(guān)察彈力蛋白酶誘導(dǎo)法建立的實(shí)驗(yàn)組B、C、D各組動(dòng)脈瘤模型瘤壁的組織病理學(xué)變化及瘤壁的結(jié)構(gòu)重塑。同樣，采用外科手術(shù)法取下對(duì)照組A組右側(cè)頸總動(dòng)脈部盲端血管，，觀(guān)察盲端的生長(zhǎng)情況，有無(wú)血栓形成。并使用游標(biāo)卡尺精確測(cè)量右側(cè)頸總動(dòng)脈盲端血管的長(zhǎng)度、直徑，取下盲端血管，組織包埋，采用冰凍切片方法，冰凍切片機(jī)刀片平行于頸總動(dòng)脈血管橫截面進(jìn)行切片，經(jīng)HE染色處理盲端血管管壁。觀(guān)察比較對(duì)照組A組兔頸部血管與實(shí)驗(yàn)組動(dòng)脈瘤血管的變化及驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)組兔頸動(dòng)脈瘤模型成功建立的可行性。2.選擇對(duì)照組模型的血管標(biāo)本和各實(shí)驗(yàn)組2周、3周、4周的模型動(dòng)脈瘤標(biāo)本，既使用上述準(zhǔn)備的冰凍切片標(biāo)本經(jīng)免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)VEGF、TGF-β在彈力蛋白酶誘導(dǎo)法建立的兔頸動(dòng)脈瘤模型動(dòng)脈瘤壁中的表達(dá)。 結(jié)果：1.HE染色結(jié)果：經(jīng)高倍光學(xué)攝像顯微鏡觀(guān)察到對(duì)照組A組血管管壁結(jié)構(gòu)無(wú)明顯變化，管腔無(wú)擴(kuò)大或縮小，血管的各層結(jié)構(gòu)清晰可見(jiàn)，中層彈力層正常結(jié)構(gòu)存在、彈力層無(wú)斷裂、連續(xù)性完整，平滑肌細(xì)胞數(shù)量無(wú)明顯增多或減少，大小無(wú)改變，呈環(huán)形排列整齊，厚度均勻一致，管壁無(wú)重塑。實(shí)驗(yàn)組動(dòng)脈瘤模型動(dòng)脈瘤管腔擴(kuò)大，動(dòng)脈瘤內(nèi)膜、瘤壁變薄、血管彈力層減少或消失，中層平滑肌細(xì)胞排列紊亂，經(jīng)彈力蛋白酶作用細(xì)胞溶解數(shù)量減少，血管正常管壁結(jié)構(gòu)消失；2.使用免疫組化法驗(yàn)證VEGF、TGF-β在彈力蛋白酶誘導(dǎo)法建立的兔頸動(dòng)脈瘤模型動(dòng)脈瘤壁中的表達(dá)，可見(jiàn)VEGF、TGF-β在對(duì)照組中無(wú)表達(dá)或少量表達(dá)，在實(shí)驗(yàn)組21只成功建立的動(dòng)脈瘤的模型中，VEGF在動(dòng)脈瘤模型中的陽(yáng)性表達(dá)于2周左右達(dá)到高峰，之后表達(dá)強(qiáng)弱處于穩(wěn)定狀態(tài)無(wú)明顯變化，實(shí)驗(yàn)組B、C、D各組動(dòng)脈瘤瘤壁中VEGF的表達(dá)率明顯高于對(duì)照組（P㩳0.05）；TGF陽(yáng)性表達(dá)3周左右達(dá)到高峰，TGF-β的表達(dá)2周至3周呈遞增趨勢(shì)，3周至4周表達(dá)呈遞減趨勢(shì)，實(shí)驗(yàn)組B、C、D各組動(dòng)脈瘤瘤壁中TGF-β的表達(dá)率明顯高于對(duì)照組A組（P㩳0.05）。 結(jié)論：1.兔頸動(dòng)脈瘤模型瘤壁與人顱內(nèi)自發(fā)形成的動(dòng)脈瘤在瘤壁組織病理生理學(xué)變化及其管壁結(jié)構(gòu)重塑方面相類(lèi)似。2.實(shí)驗(yàn)組各組兔頸動(dòng)脈瘤模型瘤壁中VEGF、TGF-β的表達(dá)明顯增加。VEGF在動(dòng)脈瘤模型的形成過(guò)程中，參與瘤壁的炎癥反應(yīng)，具有促進(jìn)內(nèi)膜修復(fù)、新生血管形成的作用；TGF-β不僅直接作用于管壁全層參與了動(dòng)物模型瘤壁的炎癥反應(yīng)、血管壁重塑，而且對(duì)VEGF的表達(dá)起著一定的調(diào)控作用。
【關(guān)鍵詞】：彈力蛋白酶 兔頸動(dòng)脈瘤模型 DSA HE染色 VEGF TGF-β
【學(xué)位授予單位】：延安大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R743;R-332
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-11
• 第一部分：模型的建立及驗(yàn)證11-30
• 緒論11-16
• 材料與方法16-20
• 結(jié)果20-21
• 討論21-23
• 結(jié)論23-24
• 參考文獻(xiàn)24-27
• 附圖27-30
• 第二部分：VEGF、TGF-β在模型中的表達(dá)情況及機(jī)制的探究30-51
• 緒論30-34
• 材料與方法34-39
• 結(jié)果39-41
• 討論41-43
• 結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-48
• 附圖48-51
• 致謝51-52
• 科研成果及論文發(fā)表52

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 李建芝,常青,唐海蘭,黃華梅,關(guān)潔賓,李自成;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子與家兔動(dòng)脈粥樣硬化病變進(jìn)展的關(guān)系[J];中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志;2002年06期

  本文關(guān)鍵詞：兔頸動(dòng)脈瘤模型的建立及基礎(chǔ)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：467474