本文關(guān)鍵詞：基于重組慢病毒的新型HBV表型分析系統(tǒng)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：以慢病毒系統(tǒng)為基礎(chǔ)，結(jié)合HBV聚合酶反式互補(bǔ)技術(shù)建立一種全新的HBV體外表型分析系統(tǒng)。 方法： 1.將HBV pol克隆到慢病毒載體pLenti-mcs，得到重組質(zhì)粒pLenti-pol，重組質(zhì)粒pLenti-pol與三種慢病毒包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293FT細(xì)胞，產(chǎn)生HBV pol重組慢病毒，命名為Lenti-pol； 2.構(gòu)建pol基因表達(dá)缺失的HBV1.1倍體質(zhì)粒，，將其轉(zhuǎn)染至HEK293細(xì)胞中，經(jīng)過兩個(gè)月的G418篩選，獲得pol基因表達(dá)缺失的HBV1.1倍體穩(wěn)定細(xì)胞系，命名為HBV P-293； 3.利用反式互補(bǔ)，將重組慢病毒Lenti-pol導(dǎo)入到穩(wěn)定細(xì)胞系HBVP-293中，經(jīng)過10天殺稻瘟菌素(blasticidin)篩選之后，對(duì)獲得的細(xì)胞293HBV P-+P進(jìn)行HBV復(fù)制鑒定； 4.利用293HBV P-+P細(xì)胞，進(jìn)行野生型HBV藥物敏感性分析實(shí)驗(yàn)； 5.構(gòu)建系列含有RT典型耐藥突變的HBV pol重組慢病毒，通過反式互補(bǔ)，獲得可復(fù)制這些突變病毒的細(xì)胞系。 結(jié)果： 1. HBV pol重組慢病毒構(gòu)建成功； 2.成功構(gòu)建pol基因表達(dá)缺失的HBV1.1倍體穩(wěn)定細(xì)胞系； 3.將重組慢病毒Lenti-pol導(dǎo)入到穩(wěn)定細(xì)胞系HBV P-293中，HBVP-293能夠復(fù)制HBV DNA； 4.成功構(gòu)建一系列含有RT典型耐藥突變的HBV pol重組慢病毒,分別導(dǎo)入HBV P-293中，獲得相應(yīng)突變病毒復(fù)制細(xì)胞系。 結(jié)論：成功構(gòu)建了一種基于重組慢病毒的新型HBV表型分析系統(tǒng)，該系統(tǒng)將有助于更有效地進(jìn)行HBV體外表型分析。
【關(guān)鍵詞】：慢病毒 聚合酶基因 耐藥 表型分析
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R373.21
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對(duì)照5-7
• 摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 前言11-13
• 1 材料與方法13-35
• 2 結(jié)果35-51
• 3 討論51-53
• 全文總結(jié)53
• 本課題創(chuàng)新點(diǎn)53-54
• 參考文獻(xiàn)54-56
• 文獻(xiàn)綜述56-66
• 參考文獻(xiàn)63-66
• 致謝66-67
• 攻讀學(xué)位期間撰寫和發(fā)表的論文67-68
• 攻讀學(xué)位期間參加的會(huì)議68-69

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 常靜霞;汪茂榮;;乙型肝炎病毒基因耐藥變異研究進(jìn)展[J];實(shí)用肝臟病雜志;2013年05期

2 宋閩寧;黃文琪;閔峰;;核苷和核苷酸類藥物治療慢性乙型肝炎產(chǎn)生多重耐藥的挽救治療觀察[J];臨床肝膽病雜志;2013年08期

3 李平;駱抗先;何海棠;汪茂榮;常靜霞;;乙型肝炎病毒rtA181變異的臨床特點(diǎn)分析[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2013年09期

4 陳成偉;陳從新;陳士俊;陳永平;成軍;程明亮;竇曉光;段鐘平;高志良;侯金林;賈繼東;江家驥;李杰;李蘭娟;李彤;魯鳳民;茅益民;繆曉輝;寧琴;�？∑�;任紅;斯崇文;孫永濤;譚德明;唐紅;唐小平;萬謨彬;王德?lián)P;王貴強(qiáng);王豪;王慧芬;王宇明;魏來;翁心華;謝青;楊益大;尤紅;張玲霞;張文宏;張欣欣;莊輝;;核苷和核苷酸類藥物治療慢性乙型肝炎的耐藥及其管理[J];慢性病學(xué)雜志;2013年02期

5 Francisco Rodriguez-Frias;Maria Buti;David Tabernero;Maria Homs;;Quasispecies structure,cornerstone of hepatitis B virus infection: Mass sequencing approach[J];World Journal of Gastroenterology;2013年41期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李平;乙型肝炎病毒逆轉(zhuǎn)錄酶區(qū)A181T/V變異的相關(guān)研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 王琳;我國流行C基因型野生和耐藥HBV穩(wěn)定復(fù)制細(xì)胞系的建立及應(yīng)用[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2013年

2 王曉英;慢乙肝患者HBVcccDNA與血清HBVDNA及其標(biāo)志物相關(guān)性研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2013年

3 鄧孝林;乙型肝炎病毒準(zhǔn)種在恩替卡韋補(bǔ)救治療中的動(dòng)態(tài)演變[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

  本文關(guān)鍵詞：基于重組慢病毒的新型HBV表型分析系統(tǒng)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：467861