本文關(guān)鍵詞：不同物種細(xì)胞色素C的抗氧化能力分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：本研究的核心內(nèi)容是不同物種來源的細(xì)胞色素C對線粒體活性氧產(chǎn)生的調(diào)節(jié)作用的比較分析，并試圖將細(xì)胞色素C對活性氧的清除能力與其分子結(jié)構(gòu)微變化進(jìn)行一定的聯(lián)系，為以后闡述細(xì)胞色素C對人類疾病和壽命的影響打下基礎(chǔ)。 細(xì)胞色素c是一個(gè)以血紅素c為輔基的小而穩(wěn)定的血紅素蛋白，在細(xì)胞的能量代謝、細(xì)胞凋亡及自由基調(diào)節(jié)等諸多方面均起到重要的作用[1]。本實(shí)驗(yàn)組早期結(jié)果發(fā)現(xiàn)[2,3]，線粒體中存在著細(xì)胞色素C介導(dǎo)的電子漏旁路途徑，，可以原位的自主消除呼吸鏈附近的活性氧，使活性氧水平處于一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡的狀態(tài)。初步結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，不同物種來源的細(xì)胞色素C在相同濃度下其抗自由基的能力不同，在本研究中對其進(jìn)行了進(jìn)一步的分析。 我們以去除細(xì)胞色素C的心肌制劑為實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，以魯米諾聯(lián)合辣根過氧化物酶啟動(dòng)的化學(xué)發(fā)光法測定系統(tǒng)內(nèi)過氧化氫的含量，以光澤精啟動(dòng)的化學(xué)發(fā)光法測定系統(tǒng)內(nèi)超氧陰離子的含量。通過細(xì)胞色素C的拆合重組實(shí)驗(yàn)測定不同濃度細(xì)胞色素C的抗氧化能力，確立了計(jì)算不同物種細(xì)胞色素C抗氧化能力的兩個(gè)反應(yīng)濃度：高濃度（2μM）和低濃度（0.5μM）。選擇了來源于酵母、鴿子和牛三個(gè)不同物種的細(xì)胞色素C，將之放在同樣的反應(yīng)體系中，比較它們的抗氧化能力的差別。同時(shí)，我們也比較了細(xì)胞色素C在氧化狀態(tài)和還原狀態(tài)時(shí)其抗氧化能力的不同趨勢。 結(jié)果顯示： 1）在未達(dá)到飽和重組濃度的情況下，三個(gè)物種的常態(tài)細(xì)胞色素C對O2伲虷2O2的清除作用隨物種不同而不同。清除能力最小的酵母源的細(xì)胞色素C只能清除43％的H2O2和63％的O－2�，而清除能力揍暱的鸽胸细胞色素C對兩種ROS的清除能力都在80％～90％。其抗氧化能力排序?yàn)轼澬卦磁Ｐ脑唇湍冈�。而高濃度的�?xì)胞色素C由于清除能力過強(qiáng)，未體現(xiàn)顯著性差異； 2）加入抗霉素A阻斷電子傳遞后，由于參比值的增加，高濃度重組常態(tài)細(xì)胞色素C均顯示了物種差異，其抗氧化能力排序?yàn)轼澬卦磁Ｐ脑唇湍冈�，與未加入抗霉素A的低濃度重組相同。在低濃度情況下，由于參比的提高，三種細(xì)胞色素C對O－2俸虷2O2的消除能力均降到了最大值的40％以下，且無明顯差異。 3）全還原態(tài)細(xì)胞色素C的抗氧化能力也隨物種不同而有區(qū)別。在高濃度細(xì)胞色素C重組的情況下，由于清除能力過強(qiáng)，差異不顯著。但在低濃度細(xì)胞色素C重組的情況下，鴿胸源的還原態(tài)細(xì)胞色素C抗氧化能力與酵母源的還原態(tài)細(xì)胞色素C的抗氧化能力相當(dāng)，強(qiáng)于牛心源的還原態(tài)細(xì)胞色素C。也就是說，其抗氧化能力的排序與常態(tài)細(xì)胞色素C相比有所不同。 4）在加入了抗霉素A阻斷電子傳遞鏈功能后，無論在高濃度重組情況下還是低濃度重組情況下，酵母源和鴿胸源的還原態(tài)細(xì)胞色素C對ROS的清除能力較強(qiáng)且無顯著性差異，而牛心源的還原態(tài)細(xì)胞色素C清除ROS的能力相對較弱。 因此，大致結(jié)論如下：A:細(xì)胞色素C的抗氧化能力，無論是通過氧化態(tài)消除O2伲哪芰故腔乖鼿2O2的能力，在不同物種來源中均有區(qū)別，，其根源在于蛋白質(zhì)微結(jié)構(gòu)變化的影響。擴(kuò)大物種的研究范圍，對它們的結(jié)構(gòu)進(jìn)行精細(xì)分析，對于探討延緩衰老、預(yù)防老年退行性疾病具有一定的價(jià)值。B:由于物種選取的較少，且進(jìn)化上差異過大，目前無法驗(yàn)證細(xì)胞色素C的抗氧化能力是否與物種壽命相關(guān)，需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)；C:還原態(tài)的酵母細(xì)胞色素C在豬心的呼吸鏈制劑中依然可以發(fā)揮其抗氧化能力，并不需要外加細(xì)胞色素C過氧化物酶催化，具體機(jī)制有待進(jìn)一步探討。
【關(guān)鍵詞】：細(xì)胞色素C 抗氧化 氧化還原狀態(tài) 物種 蛋白質(zhì)微結(jié)構(gòu)
【學(xué)位授予單位】：天津體育學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 1.前言9-12
• 2.材料與方法12-18
• 2.1 材料來源12
• 2.2 儀器設(shè)備12-13
• 2.3 試劑13-14
• 2.3.1 主要試劑及其來源13-14
• 2.3.2 試劑配制14
• 2.4 心肌制劑（HMP）制備14-15
• 2.5 去除細(xì)胞色素 C 的心肌制劑（c-dHMP）的制備15
• 2.6 Bradford 法測定蛋白質(zhì)濃度15
• 2.7 還原態(tài)細(xì)胞色素 C 的制備15-16
• 2.8 還原態(tài)細(xì)胞色素 C 的鑒定16
• 2.9 c-dHMP 和 HMP 呼吸能力的測定16-17
• 2.10 O_2~-含量分析17
• 2.11 H_2O_2含量分析17-18
• 2.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法18
• 3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果18-35
• 3.1 c-dHMP 的細(xì)胞色素 C 重組可以恢復(fù)琥珀酸氧化酶活力18-19
• 3.2 還原態(tài)細(xì)胞色素 C 的光譜學(xué)分析19-20
• 3.3 實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞色素 C 濃度的選擇20-24
• 3.3.1 利用超微弱化學(xué)發(fā)光法測定 O_2~.-的實(shí)際圖像20
• 3.3.2 利用超微弱化學(xué)發(fā)光法測定 H_2O_2的實(shí)際圖像20-21
• 3.3.3 細(xì)胞色素 C 對 c-dHMP 產(chǎn)生的 O_2~.-起下調(diào)作用21-22
• 3.3.4 細(xì)胞色素 C 對 c-dHMP 產(chǎn)生的 H_2O_2起下調(diào)作用22-23
• 3.3.5 物種比較實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞色素 C 濃度的選擇23-24
• 3.4 不同物種天然態(tài)細(xì)胞色素 C 消除 O_2.~-的能力比較24-26
• 3.4.1 低濃度（0.5μM）情況下，不同物種的細(xì)胞色素 C 對 O_2~.-的清除能力比較24-26
• 3.4.2 高濃度（2 μM）情況下，不同物種的細(xì)胞色素 C 對 O_2~.-的清除能力比較26
• 3.5 不同物種天然態(tài)細(xì)胞色素 C 消除 H_2O_2的能力比較26-27
• 3.6 抗霉素 A 阻斷呼吸鏈對不同物種的天然態(tài)細(xì)胞色素 C 抗氧化能力的影響27-30
• 3.6.1 在抗霉素 A 的存在下，不同物種細(xì)胞色素 C 的清除 O.-2的能力比較28-29
• 3.6.2 在抗霉素 A 的存在下，不同物種細(xì)胞色素 C 的清除 H2O2的能力比較29-30
• 3.7 不同物種還原態(tài)細(xì)胞色素 C 的抗氧化能力分析30-35
• 3.7.1 不同物種還原態(tài)細(xì)胞色素 C 去除 c-dHMP 系統(tǒng)產(chǎn)生的 O_2賬－的能力比較30-31
• 3.7.2 在抗霉素 A 存在的情況下不同物種還原態(tài)細(xì)胞色素 C 去除 c-dHMP 系統(tǒng)產(chǎn)生的O_2賬－的能力比較31
• 3.7.3 不同物種還原態(tài)細(xì)胞色素 C 去除 c-dHMP 系統(tǒng)產(chǎn)生的 H_2O_2的能力比較31-34
• 3.7.4 在抗霉素 A 存在的情況下不同物種還原態(tài)細(xì)胞色素 C 去除 c-dHMP 系統(tǒng)產(chǎn)生的H_2O_2的能力比較34-35
• 4. 討論35-43
• 4.1 細(xì)胞色素 C 的抗氧化能力與其物種來源具有一定的相關(guān)性35-37
• 4.2 細(xì)胞色素Ｃ介導(dǎo)的電子漏旁路途徑的抗氧化能力與物種相關(guān)37-38
• 4.3 不同物種的細(xì)胞色素 C 的抗氧化能力與物種壽命是否相關(guān)38-41
• 4.4 酵母還原態(tài)細(xì)胞色素 C 可以在 c-dHMP 系統(tǒng)中消除 H_2O_241-43
• 5.結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-50
• 綜述50-61
• 參考文獻(xiàn)57-61
• 附錄61-62
• 致謝62

【參考文獻(xiàn)】

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1 繆明永,王學(xué)敏,宋春橋;線粒體、細(xì)胞色素c與細(xì)胞凋亡[J];生命的化學(xué);1999年02期

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本文編號：459981