本文關(guān)鍵詞：TACI-Fc及配體BAFF的表達(dá)，純化和活性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：B淋巴細(xì)胞激活因子(B cell-activation factor,BAFF)和一種誘導(dǎo)增殖配體(Aproliferation-inducing ligand,APRIL),同屬于腫瘤壞死因子(TNF)超家族,并且兩者蛋白質(zhì)序列有33%的同源性。這兩種因子有兩個(gè)共同受體：穿膜蛋白活化物(transmembrane activator and CAML interactor,TACI)和B細(xì)胞成熟抗原(B cell maturation antigen,BCMA)。BAFF和APRIL參與自身免疫性疾病的發(fā)生和發(fā)展,并成為治療藥物的靶點(diǎn)。本文中我們將TACI胞外區(qū)基因與人IgG的Fc片段的DNA序列進(jìn)行重組,構(gòu)建畢赤酵母真核表達(dá)載體pPIC9K-TACI-Fc,轉(zhuǎn)化畢赤酵母GS115菌種,得到了重組TACI-Fc融合蛋白的表達(dá)克隆,并進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)和純化及生物學(xué)活性的鑒定工作。該項(xiàng)研究取得的主要結(jié)果如下： 1)經(jīng)過(guò)重疊PCR成功將TACI胞外區(qū)基因與IgG的Fc片段進(jìn)行重組,融合DNA序列與GenBank序列一致。 2)將TACI-Fc片段插入到畢赤酵母表達(dá)質(zhì)粒pPIC9K中,并轉(zhuǎn)化畢赤酵母GS115感受態(tài)細(xì)胞,篩選出表達(dá)克隆。SDS-PAGE分析可見(jiàn)在35kD處有目的蛋白條帶。Western Bloting結(jié)果顯示該蛋白與抗TACI的單克隆抗體呈陽(yáng)性反應(yīng)。 3)進(jìn)行TACI-Fc畢赤酵母表達(dá)菌的高密度發(fā)酵工作,并經(jīng)過(guò)超濾、分子篩及proteinA蛋白親和層析等純化技術(shù)純化出TACI-Fc融合蛋白。 4)構(gòu)建BAFF原核表達(dá)載體pET32a-BAFF,并轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21菌種Transetta,經(jīng)IPTG誘導(dǎo),并優(yōu)化誘導(dǎo)條件,成功實(shí)現(xiàn)了BAFF的高效可溶性表達(dá)。隨后進(jìn)行組氨酸蛋白親和層析將BAFF純化,得到較高純度的BAFF蛋白。 5)將純化的BAFF和TACI-Fc進(jìn)行誘導(dǎo)Raji增殖實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示表達(dá)純化的BAFF可以促進(jìn)Raji B淋巴瘤細(xì)胞增殖,并TACI-Fc可以減弱BAFF和APRIL對(duì)RajiB淋巴瘤細(xì)胞的增殖作用。
【關(guān)鍵詞】：融合蛋白TACI-Fc BAFF 畢赤酵母 原核表達(dá) Raji B細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R392
【目錄】：

• 英文縮寫(xiě)3-4
• 中文摘要4-5
• Abstract5-6
• 前言6-16
• 參考文獻(xiàn)11-16
• 第一部分 TACI-Fc融合蛋白的表達(dá)、純化16-35
• 引言16-17
• 材料與方法17-27
• 結(jié)果27-33
• 討論33-34
• 小結(jié)34-35
• 第二部分 BAFF蛋白的表達(dá)及純化35-46
• 引言35
• 材料與方法35-40
• 結(jié)果40-44
• 討論44-45
• 小結(jié)45-46
• 第三部分 TACI-Fc阻斷BAFF/APRIL對(duì)Raji B細(xì)胞的增殖作用46-54
• 引言46
• 材料與方法46-48
• 結(jié)果48-53
• 討論53-54
• 總結(jié)與討論54-56
• 參考文獻(xiàn)56-58
• 綜述：BAFF/APRIL與自身免疫性疾病的關(guān)系58-75
• 參考文獻(xiàn)66-75
• 致謝75-76

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

1 陳爭(zhēng)光;汪受傳;魏肖云;徐建亞;;金欣口服液含藥血清對(duì)RSV感染RAW264.7細(xì)胞的RIG-I信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響[J];中華中醫(yī)藥雜志;2014年05期

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本文編號(hào)：459694