本文關(guān)鍵詞：靶向RECQL4基因的shRNA慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的構(gòu)建介導(dǎo)RECQL4 RNA干擾的shRNA慢病毒表達(dá)載體。方法將人工合成的RECQL4 siRNA經(jīng)PCR擴(kuò)增后與線化的p LKO.1慢病毒表達(dá)載體連接,經(jīng)測(cè)序鑒定后,將p LKO.1-RECQL4-shRNA與慢病毒包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染入HEK-293T細(xì)胞,產(chǎn)生慢病毒顆粒并測(cè)定病毒滴度。體外感染人結(jié)腸癌細(xì)胞RKO后,實(shí)時(shí)定量PCR和Western blot檢測(cè)RECQL4 mRNA和蛋白的沉默效果。設(shè)置未加入任何慢病毒表達(dá)載體的RKO細(xì)胞為未感染組,感染p LKO.1-scramble-shRNA慢病毒載體為陰性對(duì)照組。結(jié)果基因測(cè)序結(jié)果證實(shí)成功構(gòu)建p LKO.1-RECQL4-shRNA慢病毒表達(dá)載體。測(cè)定包裝后的慢病毒顆粒滴度為6.70×107IU/m L。感染RKO細(xì)胞后,RECQL4的mRNA和蛋白表達(dá)量均低于陰性組和未感染組。結(jié)論成功構(gòu)建靶向RECQL4基因的shRNA慢病毒表達(dá)載體,可有效抑制人結(jié)腸癌RKO細(xì)胞RECQL4 mRNA和蛋白的表達(dá)。
【作者單位】： 中山大學(xué)附屬第六醫(yī)院食管胃腸外科;
【關(guān)鍵詞】： 慢病毒表達(dá)載體 RECQL shRNA 結(jié)腸癌
【基金】：廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào):2010B031500009) 高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專項(xiàng)科研基金資助項(xiàng)目(編號(hào):2011017110075)
【分類號(hào)】：R373
【正文快照】： RECQ解螺旋酶基因突變和表達(dá)異常能導(dǎo)致嚴(yán)重的細(xì)胞缺陷。在哺乳動(dòng)物中包含有5個(gè)成員:WRN、BLM、RECQL、RECQL4和RECQL5。RECQL4(RECQprotein-like 4)作為RECQ解螺旋酶家族的一個(gè)成員,在多種腫瘤如骨肉瘤、前列腺癌、乳腺癌和宮頸癌等均可見其突變或過表達(dá)[1-4]。2012年6月至20

【共引文獻(xiàn)】

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中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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3 朱明s，

本文編號(hào)：446924