本文關鍵詞：梅毒螺旋體重組蛋白TpF1在梅毒血清學診斷中的應用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：構(gòu)建梅毒螺旋體(Treponema palludim, Tp)重組蛋白TpF1的原核表達載體，在大腸桿菌中進行誘導表達，純化表達產(chǎn)物并進行免疫原性和免疫反應性分析，為進一步探索重組蛋白TpF1在梅毒血清學診斷中的應用及其生物學功能提供一定的實驗依據(jù)。 方法：從GenBank獲取TpF1基因序列，設計引物，以Tp Nichols標準株基因組DNA為模板，PCR擴增其全基因片段；構(gòu)建pET28a-TpF1原核表達載體，酶切、測序鑒定后，轉(zhuǎn)化至表達宿主菌E.coli BL21(DE3)中，IPTG誘導重組蛋白TpF1的表達，SDS-PAGE和WesternBlot對表達產(chǎn)物進行分析、鑒定；用Ni2+-NTA親和層析柱純化重組蛋白，BCA法測定蛋白濃度；收集重組蛋白免疫兔血清、Tp Nichols標準株和Tp臨床分離株（nhgz01和nhgz02）感染兔血清，，WesternBlot檢測重組蛋白TpF1的免疫原性和免疫反應性；建立TpF1-ELISA方法，分別檢測各期梅毒患者血清、交叉血清及陰性血清，初步評價重組蛋白TpF1在梅毒血清學診斷中的應用價值。 結(jié)果：通過PCR擴增獲得約500bp大小目的片段；pET28a-TpF1重組質(zhì)粒經(jīng)雙酶切鑒定和基因測序分析證實插入片段為TpF1目的基因序列；SDS-PAGE結(jié)果顯示，在IPTG誘導下，E.coli BL21表達菌成功表達了一相對分子量（Mr）約為20kDa的目的蛋白，目的蛋白在表達菌中能夠以可溶性蛋白形式表達；利用純化的重組蛋白TpF1免疫新西蘭兔，ELISA法測定兔免疫血清特異性抗體效價在1:20480以上；WesternBlot檢測結(jié)果顯示兔免疫血清、Tp Nichols標準株和Tp臨床分離株（nhgz01和nhgz02）感染兔血清與重組蛋白TpF1有特異性抗體反應；建立的TpF1-ELISA法檢測各期梅毒陽性血清、交叉血清及陰性血清，其特異性和敏感性分別為100%和98%。 結(jié)論： 1成功構(gòu)建了pET28a-TpF1原核表達載體，并在E.coli BL21表達菌中表達出相對分子量（Mr）為20kDa的重組蛋白TpF1。 2重組蛋白TpF1具有較強的免疫原性，能誘導新西蘭兔產(chǎn)生高效價的特異性抗體。 3重組蛋白TpF1具有良好免疫反應性，檢測梅毒血清的敏感性和特異性分別為98%和100%，可作為梅毒血清學診斷的候選抗原之一。
【關鍵詞】：梅毒螺旋體 梅毒 TpF1 血清學診斷 重組蛋白
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R377.1
【目錄】：

• 主要縮略語英文索引4-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 1. 前言10-13
• 2. 實驗材料13-16
• 3. 實驗方法16-28
• 4. 實驗結(jié)果28-40
• 5. 討論40-43
• 6. 結(jié)論43-44
• 參考文獻44-47
• 附錄47-49
• 文獻綜述49-61
• 參考文獻57-61
• 碩士期間發(fā)表論文情況61-62
• 致謝62

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 蔣傳好;趙飛駿;吳移謀;;梅毒螺旋體致病相關蛋白的研究進展[J];中南醫(yī)學科學雜志;2011年05期

2 ;Translational medicine in China Ⅰ:Perspectives from Chinese physicians and scientists[J];Science China(Life Sciences);2011年12期

3 ;Some research advances of immune mechanism during infection in China[J];Science China(Life Sciences);2011年12期

4 馬強;耿焱;黃茂梁;吳英松;李明;;梅毒螺旋體0751基因的克隆、表達及鑒定[J];熱帶醫(yī)學雜志;2011年06期

5 梁芳;曾朝陽;李桂源;;鼻咽癌相關固有免疫分子及其潛在臨床轉(zhuǎn)化前景[J];轉(zhuǎn)化醫(yī)學雜志;2013年01期

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 王玉麗;早期梅毒患者TLR2的表達及其與Th細胞亞群的相關性研究[D];山西醫(yī)科大學;2011年

2 裴瑞青;梅毒螺旋體粘附蛋白Tp0155、Tp0483通過激活NF-κB誘導人巨噬細胞產(chǎn)生炎性細胞因子[D];南華大學;2011年

3 姚玲;梅毒螺旋體黏附素Tp0751抗原表位的預測與鑒定[D];南華大學;2013年

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本文編號：446929